龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

发布时间：2017-09-22 04:40

  本文关键词：龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

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【摘要】：目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细胞悬液,配制0.05g/mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0.15、0.25、0.5、1.0、2.0μL染色液,考察最佳染色浓度;分别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分型检测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果 100μL细胞悬液加入0.5μL 0.05g/mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫红色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无明显抑制(P0.05)。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法利于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院法医教研室;公安部物证鉴定中心法医遗传学公安部重点实验室;中国人民公安大学;
【关键词】： 法医物证学 龙胆紫染色法 显微捕获联合低体积扩增 口腔上皮细胞
【基金】：“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAK07B01)
【分类号】：D919
【正文快照】： 显微捕获分离单细胞联合低体积扩增(LV-PCR)技术,为法医混合微量生物检材提供了新的检验方法,现已逐步推广应用[1-3]。由于各种因素的影响,在显微捕获单细胞时,可能遇到细胞核降解和杂质干扰,显微镜下难于辨认和捕获。采用染色法标识细胞核,有助于镜下辨识目标细胞。常规组织

【参考文献】

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1 李鑫;胡兰;郭红玲;刘志芳;Q谜，

本文编号：898867