环境内分泌干扰物筛选的受体报告基因试验研究

发布时间：2020-04-29 22:34

【摘要】：受体报告基因试验也称受体转录激活试验,是EPA推荐的用于环境内分泌干扰物(EEDs)筛选的In vitro方法之一。受体报告基因试验是以受体介导理论为基础,应用基因重组技术,将报告基因置于外源性激素效应元件(HRE)的调控之下,构建重组报告基因载体,应用基因转染技术导入真核细胞内,通过检测EEDs作用下报告基因编码的酶活性或蛋白表达的变化,间接反映内源性基因的表达情况。研究表明,这种方法既可检测化学物与受体的结合能力,又可检测结合后引起的生物学效应,而且能够区分激动剂和拮抗剂,与受体结合试验相比可提供更多的信息,因此成为EEDs筛选的有力工具。本研究将受雄激素效应元件(ARE)、雌激素效应元件(ERE)调控的重组报告基因质粒和相应表达雄激素受体(AR)、雌激素(ER)的质粒分别共转染非洲猴肾细胞株CV-1,建立AR、ER报告基因试验。
【图文】：

发光法或甄瑞A法侧定图2受体报告基因试验原理用基因重组技术，将报告基因置于外源性HRE的调控之下，，构建重组报告基质粒，同时构建受体表达质粒，应用基因共转染技术将两种载体导入真核细胞。某些激素或具有激素活性的化学物作为一种配体，特异地与受体结合形成配一受体复合物，hPs解离，受体发生构象改变并二聚体化。这种二聚体化的复合与重组报告基因质粒中的HRE结合，激活报告基因，触发基因转录形成RNA，mRNA进一步翻译为蛋白质，通过检测报告基因编码的酶活性或蛋白表的变化，可以间接反映EEDS作用下内源性基因的表达情况。

psv一p一Gal质粒图谱
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：X503

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本文编号：2645072