有机磷农药降解菌的筛选及其降解酶特性

发布时间：2020-06-10 00:51

【摘要】：1 有机磷农药降解菌的分离、鉴定从福建三明农药厂附近的土壤分离、筛选获得一株能够高效降解甲基1605、辛硫磷、三唑磷等有机磷农药的菌株JS018，该菌在LB平板培养基上形成的菌落为粉红色，圆形，有光泽；经电镜观察，为小球状菌，，直径0.5μm～0.75μm；革兰氏染色为阴性；能够在30℃～38℃温度范围内和pH7.0～9.0范围内很好的生长，最适生长温度为32℃，最适pH7.5～8.0；在含有6％NaCl以上的培养基中，不能生长。抗生素敏感性实验表明：JS018菌对安比西林、青霉素、林肯霉素有抗性；对卡那霉素、四环素、庆大霉素等敏感。碳源发酵实验表明：该菌株能发酵葡萄糖，发酵海藻糖、松三糖、乙醇；不能发酵阿拉伯糖、蔗糖、甘露糖、木糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖等；不能利用棕檬酸盐，不能液化明胶，不产生硫化氢，能还原硝酸盐，不产生吲哚，接触酶阳性，脲酶阳性。根据其形态特征，生理生化特性、16S rDNA序列分析，初步鉴定JS018为Roseomonas(玟瑰单胞菌属)，Roseomonas共有6个基因型种，其中的三个已正式命名，另外三个还没有正式命名。从16S rDNA序列同源性分析，JS018与Roseomonas genomospecfes 4同源性最高，而从其它生理生化特征分析，尤其是对七叶苷水解、甘露糖氧化、葡萄糖发酵等方面与Roseomonas属的6个基因型种都有差别，JS018菌很可能是一种新种，国内还没有关于Roseomonas属的任何菌株的报道，且国内外尚未报道过该属内有降解农药的菌株。 2 JS018菌对农药的降解性能及产酶条件的优化 JS018对甲基1605、辛硫磷、三唑磷、敌敌畏等有机磷农药的降解率很高，在LB培养基中发酵36小时，降解率分别为96％、99％、98.9％、69.0％；对喹硫磷、马拉辛硫磷的降解率较高，分别为49.3％、49.4％；而对毒死婢几乎不降解，对溴氰菊酯和甲氰菊酯的降解率也非常低，几乎也不降解。 JS018产酶的最适培养基配方为：0.07％KH_2PO_4，0.03％K_2HPO_4，0.02％MgSO_4，0.1％葡萄糖，0.1％酵母粉，最适温度为37℃，pH7.0。 3 JS018菌有机磷农药降解酶的纯化及同源性分析 JS018菌有机磷农药降解酶经硫酸铵分级沉淀，Sephadex G-100凝胶过滤，
【图文】：

波形,甲基1605,对硝基苯酚

从平板中挑取周围呈黄色的菌落，经过筛选获得一株降解能力较强的菌株SJI，将sJl菌、JZS、.Ec口，1’划线于平板培养基上(农药浓度为300mg.L一‘)结果如图2一1(图2一1中编号Jsl后改为JSO18)，而JsZ、.Ecoli虽可在农药上生长，但经测定几乎不能降解农药.2.2降解产物的鉴定sJosl降解甲基1605后的产物和纯的对硝基苯酚液在350一800mn波长扫描的结果见图2一2.对比两图可以看出:它们的波形和峰值所在的波长基本一致，因此可以初步判定降解酶作用甲墓1605后的产物为对硝基苯酚，有效波长为405mn，这与相关参考文献报道的一致(傅国平等，200;4楚晓娜等，2003.)图2一1JS018菌在含有甲基1605的培养基上生长Fig.2一1JS018growingonmediaeon而ningParathio-nmehytl注:上排为Kc

波形,长扫描,降解产物,全波

【引证文献】