多环芳烃菲对微生物生态毒理研究、菲降解菌的分离鉴定及降解基因克隆与表达
发布时间：2020-12-09 01:54
多环芳烃（Polycyclic aromatic hydrocarbon，PAHs）在环境中分布广泛，极易在环境中累积并可通过食物链传递，对人类健康和生态环境具有很大危害性。菲因具有独特的化学结构，成为PAHs研究中的模式化合物，菲污染的研究不仅有利于污染环境中菲的去除，还可为其它PAHs污染的防治提供有价值的资料。 本文全面探讨了菲污染对淹水稻田土壤的微生物生态毒性效应并分离到两株菲降解细菌，对其进行了鉴定以及系统发育研究，同时进行了降解特性和降解基因克隆及表达方面的研究，为建立有效的菲污染预警指标体系和菲降解微生物的有效利用提供有益的参考。 本研究所获主要结论如下： 1、以杭州临平镇附近农田水稻土为材料，采用室内培养方法系统研究了不同程度的菲污染对淹水稻田土壤可培养微生物种群以及酶活性动态变化过程的影响。研究结果表明，不同浓度的菲对好氧细菌的生长和脲酶都具有刺激作用，并且刺激作用随菲浓度的升高而有所加强；不同浓度的菲对真菌和脱氢酶则在整个培养过程中都具有毒性作用，特别在高浓度菲处理土样中，这一表现更为明显；各浓度的菲都对放线菌、厌氧固氮菌和产甲烷细菌具有急性毒性效...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
表面活性剂影响菲被微生物的吸收的方式
类GST酶均有见报道。所有已知结构的GST酶均为二聚体蛋白，每一单体折叠呈两域结构，(N端域主要包括谷肤甘肤结合位点并由p叩邓pa模式组成，而C端则主要与疏水性底物的结合有关，并以a螺旋为主要组成形式)(图1一11)。细菌GST由于研究较晚，到目前为止仅有两种GsT的蛋白晶体结构公开报道(图1一11，C)，即来自大肠杆菌(Escherichiacoli)和来自于变形杆菌(尸阳reusml.ra石l’ll’s)p类GsT蛋白侧ishidaetal.，1998;Rossjohnetal，1998)。图卜llGST的亚基结构a乌贼sigma类b人omega类e细菌Beta类dF’asciolah叩arieaMu类Fig.l·11DomainstruetureofGSTsubunitsasquidSigmaelass:bhumanomegaelass:ebacterial(Proteusmtrabilis)Betaelass;dF’QseiolaheParicaMu01韶5.蛋白质研究揭示，真核生物的GSTN一端酪氨酸残基为催化活性中必需的氨基酸。原核生物虽然也有细菌可在相应位置发现有酪氨酸的存在，但酪氨酸并不是催化活性中的必需氨基酸或细菌相应位置根本缺乏酪氨酸的存在。如图1一12所示的乃刀teomjrabilisGST
互作用以极性为主，而T类和6类则是开放V形并且单体之间相互作用以疏水性为主(SheenhanDeraL，2001)。图1一12GST活性位点氨基酸残基与GSH的结合(a酪氨酸b丝氨酸c半胧氨酸)Fig.l一12Aetive一siteresiduesinGSTs(atyrbserecys)2.细菌中GST的催化类型真核生物的GST能够催化GSH和许多亲电子物质的结合，包括卤化和脂肪化芳香烃、过氧化物、异硫氰酸盐等，通过这些方式来达到对这些物质抑活降解。细菌GST虽也可催化类似反应，但它们还有一些其它的功能使它们更适合于在降解异生物质中发挥作用。2.1二氛甲烷脱氛醉(DMCD)DCMD是首个在功能和基因水平上阐明清楚的GST酶(vtriUeumier，2001)，此酶催化二氯甲烷归cM)转化成甲醛，并使某些甲基营养菌可以DcM作为唯一碳源和能源生长。与细菌DCMD亲缘关系较近的是哺乳动物DCMD/GST，两者之间具有25%的蛋白序列相似性
本文编号：2906046
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
表面活性剂影响菲被微生物的吸收的方式
类GST酶均有见报道。所有已知结构的GST酶均为二聚体蛋白，每一单体折叠呈两域结构，(N端域主要包括谷肤甘肤结合位点并由p叩邓pa模式组成，而C端则主要与疏水性底物的结合有关，并以a螺旋为主要组成形式)(图1一11)。细菌GST由于研究较晚，到目前为止仅有两种GsT的蛋白晶体结构公开报道(图1一11，C)，即来自大肠杆菌(Escherichiacoli)和来自于变形杆菌(尸阳reusml.ra石l’ll’s)p类GsT蛋白侧ishidaetal.，1998;Rossjohnetal，1998)。图卜llGST的亚基结构a乌贼sigma类b人omega类e细菌Beta类dF’asciolah叩arieaMu类Fig.l·11DomainstruetureofGSTsubunitsasquidSigmaelass:bhumanomegaelass:ebacterial(Proteusmtrabilis)Betaelass;dF’QseiolaheParicaMu01韶5.蛋白质研究揭示，真核生物的GSTN一端酪氨酸残基为催化活性中必需的氨基酸。原核生物虽然也有细菌可在相应位置发现有酪氨酸的存在，但酪氨酸并不是催化活性中的必需氨基酸或细菌相应位置根本缺乏酪氨酸的存在。如图1一12所示的乃刀teomjrabilisGST
互作用以极性为主，而T类和6类则是开放V形并且单体之间相互作用以疏水性为主(SheenhanDeraL，2001)。图1一12GST活性位点氨基酸残基与GSH的结合(a酪氨酸b丝氨酸c半胧氨酸)Fig.l一12Aetive一siteresiduesinGSTs(atyrbserecys)2.细菌中GST的催化类型真核生物的GST能够催化GSH和许多亲电子物质的结合，包括卤化和脂肪化芳香烃、过氧化物、异硫氰酸盐等，通过这些方式来达到对这些物质抑活降解。细菌GST虽也可催化类似反应，但它们还有一些其它的功能使它们更适合于在降解异生物质中发挥作用。2.1二氛甲烷脱氛醉(DMCD)DCMD是首个在功能和基因水平上阐明清楚的GST酶(vtriUeumier，2001)，此酶催化二氯甲烷归cM)转化成甲醛，并使某些甲基营养菌可以DcM作为唯一碳源和能源生长。与细菌DCMD亲缘关系较近的是哺乳动物DCMD/GST，两者之间具有25%的蛋白序列相似性
本文编号：2906046
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