解淀粉芽孢杆菌anti-CA菌株抗污损生物的研究

发布时间：2021-02-07 03:26

　　海洋污损生物对海上平台和航海设备造成了很大的危害，严重阻碍人类海上经济和军事活动。大量研究发现，海洋生物污损的关键环节是由于污损微生物的附着引起的，因此，研究具有抗微生物附着作用的防污剂具有重要意义。早期的防污剂因毒性大、难降解等缺陷已逐渐被限制使用，而天然产物防污剂具有无毒害、对环境友好等优点，目前已经成为研究的热点。然而许多天然活性产物产量低、制备成本高、稳定性差，因此亟需寻找产量高、成本低和性质稳定的抗污损生物防污剂。解淀粉芽孢杆菌可以产生多种活性物质，抑菌谱广，且生产过程简便、产量高、活性物质稳定性强，已经引起人们的广泛重视。本实验室分离得到一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens anti-CA），研究发现该菌株对常见污损细菌如蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、鳗弧菌（Vibrio anguillarum）、灿烂弧菌（V.splendidus）、哈维氏弧菌（V. harveyi）、交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）均具有显著的抑菌活性。采用薄层层... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 海洋生物污损及其危害
    2 海洋污损生物种类
        2.1 污损动物和植物
            2.1.1 藤壶
            2.1.2 海带
        2.2 污损微生物
    3 污损细菌生物膜及其危害
        3.1 污损细菌生物膜的形成
        3.2 污损细菌生物膜的危害
    4 细菌生物膜的控制方法
        4.1 物理方法
        4.2 物理化学方法
        4.3 化学方法
        4.4 生物方法
            4.4.1 微生物膜方法
            4.4.2 微生物代谢产物
    5 解淀粉芽孢杆菌
        5.1 解淀粉芽孢杆菌的应用和研究进展
        5.2 解淀粉芽孢杆菌代谢活性物质的研究进展
    6 研究目标和内容
第二章 防污损解淀粉芽孢杆菌的筛选
    0 前言
    1 材料与方法
        1.1 培养基的配制
        1.2 菌株
        1.3 筛选菌种库中具有抑制污损细菌的解淀粉芽孢杆菌
    2 结果与讨论
        2.1 解淀粉芽孢杆菌对各指示菌抑菌活性的筛选结果
        2.2 讨论
    本章小结
第三章 解淀粉芽孢杆菌 ANTI-CA 菌株代谢产物中活性成分的提取分离和结构分析
    0 前言
    1 材料和方法
        1.1 培养基
        1.2 菌株
        1.3 粗品的制备方法
            1.3.1 种子液的培养
            1.3.2 接种发酵
            1.3.3 离心
            1.3.4 盐酸酸沉
            1.3.5 冻干
            1.3.6 固相萃取
            1.3.7 粗品的抑菌活性跟踪检测
        1.4 活性成分的分离方法
            1.4.1 薄层层析法（TLC）
            1.4.2 抑菌活性跟踪
            1.4.3 柱层析法
            1.4.4 液质联用分析
    2 结果与讨论
        2.1 粗品的制备和固相萃取结果
        2.2 粗品的抑菌活性跟踪结果
        2.3 分离结果
            2.3.1 TLC 薄层层析结果
            2.3.2 TLC 分离过程中对各组分活性跟踪结果
            2.3.3 质谱分析结果
            2.3.4 液质联用和二级质谱分析结果
        2.4 讨论
    本章小结
第四章 环脂肽 6-2 抑菌谱和抑菌机理的研究
    0 前言
    1 材料和方法
        1.1 缓冲液的配制
        1.2 培养基和试剂的配制
        1.3 溶菌酶的配制
        1.4 指示菌株
        1.5 环脂肽 6-2 的抑菌谱研究方法
        1.6 环脂肽 6-2 的抑菌机理研究方法
            1.6.1 环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株的抑菌机理的研究
            1.6.2 环脂肽 6-2 对 B. cereus 的抑菌机理的研究
    2 结果和讨论
        2.1 环脂肽 6-2 抑菌谱实验结果
        2.2 环脂肽 6-2 的抑菌机理结果
            2.2.1 环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株的抑菌机理研究结果
            2.2.2 环脂肽 6-2 对 B. cereus 的抑菌机理研究结果
        2.3 讨论
    本章小结
第五章 环脂肽 6-2 抑制细菌生物膜的研究
    第一节 环脂肽 6-2 抑制细菌生物膜形成和清除研究
        0 前言
        1 材料和方法
            1.1 培养基
            1.2 受试菌株
            1.3 试剂和染料
            1.4 环脂肽 6-2 抑制细菌生物膜形成实验方法
                1.4.1 实验原理
                1.4.2 测定环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株和 B. cereus 的最小抑菌浓度（MIC）
                1.4.3 结晶紫染色法检测环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株生物膜形成的抑制
                1.4.4 结晶紫染色法检测环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株生物膜的清除
                1.4.5 结晶紫染色法检测环脂肽 6-2 对 B. cereus 生物膜形成的抑制
                1.4.6 结晶紫染色法测定环脂肽 6-2 对 B. cereus 生物膜的清除
                1.4.7 数据处理方法
            1.5 活/死菌染色法定量分析环脂肽 6-2 对细菌生物膜形成的影响
                1.5.1 共聚焦扫描显微镜检测环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株生物膜的形成影响
                1.5.2 共聚焦扫描显微镜检测环脂肽 6-2 对 B. cereus 生物膜形成的影响
        2 结果与讨论
            2.1 环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株和 B. cereus 的最小抑菌浓度测试结果
            2.2 环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株生物膜形成的抑制和清除结果
            2.3 环脂肽 6-2 对 B. cereus 生物膜的形成抑制和清除结果
            2.4 对 P. aeruginosa PAO1 菌株和 B. cereus 生物膜的抑制结果
            2.5 讨论
    第二节 环脂肽 6-2 对 P. aeruginosa PAO1 菌株胞外多糖合成基因 PslC 表达的影响
        0 前言
        1 材料和方法
            1.1 培养基和试剂
            1.2 受试菌株
            1.3 目的基因（Target Gene）
            1.4 设计引物
            1.5 实验方法
                1.5.1 种子液的培养
                1.5.2 提取 P. aeruginosa PAO1 菌株的 RNA
                1.5.3 RNA 反转录成 cDNA
                1.5.4 荧光定量 PCR
                1.5.5 相对表达量的计算方法
        2 结果与讨论
            2.1 检测提取的 RNA
            2.2 荧光定量 PCR 结果
            2.3 讨论
    本章小结
第六章 环脂肽 6-2 抑制海带孢子的萌发和对藤壶幼虫的毒性及实地实验
    第一节 环脂肽 6-2 抑制海带孢子的萌发和对藤壶幼虫的毒性实验
        0 前言
        1 材料和方法
            1.1 海带孢子的制备
            1.2 藤壶的采集
            1.3 f/2 培养基的配制
            1.4 三角褐指藻的培养
            1.5 藤壶幼虫的释放和培养
            1.6 环脂肽 6-2 溶液的制备
            1.7 环脂肽 6-2 抑制海带孢子萌发实验方法
            1.8 藤壶幼虫毒性实验方法
        2 结果与讨论
            2.1 环脂肽 6-2 抑制海带孢子萌发结果
            2.2 藤壶幼虫的培养结果
            2.3 环脂肽 6-2 对藤壶幼虫的毒性实验
            2.4 讨论
    第二节 海洋挂板实地实验
        0 前言
        1 材料和方法
            1.1 挂板的制备
            1.2 防污涂层的制备
        2 结果与讨论
            2.1 实地挂板实验结果
            2.2 讨论
    本章小结
全文总结与创新点
参考文献
攻读博士期间发表的论文
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
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[4]铜绿假单胞菌生物被膜形成过程中多糖合成相关基因表达的研究[J]. 李立艳,魏殿军,门昆,武大伟,陈锦英.  中华微生物学和免疫学杂志. 2009 (06)
[5]利用mini-Tn10转座系统研究芽孢杆菌生物被膜形成相关基因[J]. 高卫华,郝建安,夏思源,徐海津,白艳玲,张秀明,乔明强.  微生物学通报. 2009(03)
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博士论文
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[2]海洋解脂耶罗威亚酵母菌产柠檬酸的研究[D]. 刘晓燕.中国海洋大学 2012

硕士论文
[1]南极低温酵母Guehomyces pullulans 17-1菌株中海藻糖的合成与调控[D]. 张芳.中国海洋大学 2013
[2]海洋环境中钝性金属表面微生物附着的控制方法研究[D]. 成光.中国海洋大学 2006



本文编号：3021568