用于毒素检测的酶联免疫吸附测定（ELISA）研究

发布时间：2021-07-27 05:10

　　转基因蛋白Cry1Ab和黄曲霉毒素B1分别为最重要的转基因作物成份和致癌性最强、天然发生的真菌毒素,皆关乎民生。开发针对这两种毒素的快速检测方法对于日益高涨的农产品与食品安全检测、环境监测等需求有着十分重大的实用意义。本课题侧重于方法学上的创新,Cry1Ab蛋白和AFB1分别为典型的大分子和小分子抗原,依此对象建立的新方法也可以相对容易地推广到其它大分子和小分子分析物的检测；为拓展到致病菌、农药小分子等检测提供新的方法依据,服务于农业、食品、环境安全等。本课题综合利用光学、免疫学、农业与食品科学、材料科学、纳米技术、生物化学、有机化学和分析化学等诸多领域的知识,以大分子的内毒素（转基因蛋白Cry1Ab）和小分子的真菌毒素（黄曲霉毒素B1, AFB1）为对象,研究了用于毒素检测的酶联免疫吸附测定（ELISA）新方法。通过自制的纳米磁珠和商业化的核酸纯化系统,提升了免疫分析的自动化程度,建立了一种基于磁珠转运的半自动ELISA （Mts-ELISA）;将Mts-ELISA成功应用于转基因蛋白CrylAb的检测,为研发具有自主知识产权的高通量、自动化免疫分析仪器提供了方法依据。探索性地提出了... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：151 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
目次
插图清单
表格清单
英文缩略表
第一章 绪论
    提要
    1.1 研究背景
        1.1.1 毒素简介
        1.1.2 转基因作物及其风险
        1.1.3 黄曲霉毒素及其危害
    1.2 毒素或其相关衍生品的检测方法概述
        1.2.1 转基因作物检测方法概述
        1.2.2 黄曲霉毒素检测方法概述
    1.3 免疫分析检测毒素的国内外研究进展
        1.3.1 转基因作物免疫分析研究进展
        1.3.2 黄曲霉毒素免疫分析研究进展
    1.4 免疫分析方法用于毒素检测所尚存的问题
    1.5 立题的目的意义和主要研究内容
        1.5.1 选题的来源、目的和意义
        1.5.2 研究内容和研究目标
        1.5.3 技术路线
第二章 基于磁珠转运的半自动酶联免疫吸附测定检测甲胎蛋白
    提要
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料和试剂
        2.2.2 仪器设备
        2.2.3 通过水热法合成Fe_3O_4磁珠
        2.2.4 磁珠的表面修饰
        2.2.5 制备固定有一抗的免疫磁珠(Ab-MBs)
        2.2.6 免疫分析
        2.2.7 数据处理
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 磁珠表征
        2.3.2 磁珠和AFP一抗之间生物链接的优化
        2.3.3 比较Mts-ELISA与经典ELISA
        2.3.4 比较Mts-ELISA与手动磁ELISA
    2.4 本章小结
第三章 基于磁珠转运的半自动酶联免疫吸附测定检测转基因蛋白Cry1Ab
    提要
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料和试剂
        3.2.2 仪器设备
        3.2.3 水热法制备Fe_3O_4纳米磁珠
        3.2.4 磁珠的表面修饰
        3.2.5 免疫磁珠的制备
        3.2.6 基于自动磁珠转运的Mts-ELISA
        3.2.7 比色分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 Fe_3O_4纳米磁珠的制备及表征
        3.3.2 磁珠的功能化
        3.3.3 免疫检测与比色分析
        3.3.4 Mts-ELISA与商业化手动磁ELISA的对比
    3.4 本章小结
第四章 基于夹心体系的竞争性酶联免疫吸附测定检测黄曲霉毒素B1
    提要
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料和试剂
        4.2.2 仪器设备
        4.2.3 生物素标记抗体
        4.2.4 用高碘酸钠法制备HRP标记的黄曲霉毒素抗体(HRP-anti-AFB1)
        4.2.5 夹心法检测BSA-AFB1
        4.2.6 基于夹心法的竞争性ELISA检测AFB1及优化
            4.2.6.1 基于夹心法的竞争性ELISA检测AFB1(Biotin-Ab/SA-PolyHRP40体系)
            4.2.6.2 基于夹心法的竞争性ELISA检测AFB1(HRP-anti-AFB1体系,Sandwichbased competitive direct ELISA)
        4.2.7 与常规的直接竞争ELISA比较
        4.2.8 食品基质的配制及基质中的AFB1检测
        4.2.9 检测中的条件优化及比较
    4.3 结果和讨论
        4.3.1 生物素标记AFB1抗体
        4.3.2 HRP-anti-AFB1的制备与表征
        4.3.3 夹心法检测“新抗原”BSA-AFB1
        4.3.4 基于夹心法的竞争性ELISA检测AFB1(Biotin-Ab/SA-PolyHRP40体系)
        4.3.5 基于夹心法的竞争性ELISA检测AFB1(HRP-anti-AFB1体系,第一批次)
        4.3.6 夹心竞争法检测AFB1优化(HRP-anti-AFB1体系,第二批次)
        4.3.7 夹心竞争法与直接竞争法的比较
        4.3.8 食品基质中的方法评价
        4.3.9 部分操作条件的对比
    4.4 本章小结
第五章 基于聚合辣根过氧化物酶进行信号放大的间接ELISA检测黄曲霉毒素B1
    提要
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料和试剂
        5.2.2 仪器设备
        5.2.3 生物素标记抗体
        5.2.4 间接竞争法检测AFB1
        5.2.5 不同基质的AFB1标准溶液配制
        5.2.6 曲线拟合
    5.3 结果和讨论
        5.3.1 间接竞争法检测AFB1(bioAb-SA体系)的条件优化
        5.3.2 间接竞争法检测AFB1(DeAb-TrAb体系)条件优化
        5.3.3 bioAb-SA和DeAb-TrAb的系统比较
    5.4 本章小结
第六章 结论与展望
    提要
    6.1 主要研究结论
    6.2 主要创新点
    6.3 进一步研究展望
参考文献
科研成果
作者简介



本文编号：3305149