联苯/PCB对红球菌R04的影响和气囊蛋白的初步研究
发布时间：2023-11-09 20:28
多氯联苯(PCB)因其具有出色的稳定性,绝缘性以及不易燃性而被广泛应用于工业生产当中。多氯联苯的积累会影响人类的健康,引起许多疾病,例如：癌症、神经性疾病、甲状腺疾病以及免疫功能的缺失。环境中的多氯联苯以及联苯除了会对陆生及水生动物造成一系列的危害以外,还会抑制微生物的生长,影响细胞形态,抑制微生物细胞分裂,甚至影响微生物蛋白质的表达。红球菌Rhodococcus sp. R04是一株联苯降解菌株,本文以联苯为唯一碳源培养红球菌R04发现,与对照相比,联苯抑制红球菌R04的生长,并且随着培养基中联苯浓度的增大存在剂量效应关系。当以0.4mM Aroclors1221为碳源时,与对照相比,红球菌R04的生长明显受到抑制,并且延长了对数期。使用显微镜对红球菌R04不同时期菌体细胞进行观察发现,进入对数期后红球菌R04菌体出现丝状化。当培养基中联苯浓度高达42mM时或者以0.4mM Aroclors1221为碳源时,细胞分裂隔膜的形成受阻,菌体细胞丝状化后最长可达16μm。通过使用荧光显微镜对经细胞膜染料FM1-43染色后红球菌R04的生长发育进行观察发现,当培养基中联苯浓度剂量较低时,细胞...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 多氯联苯的危害
1.2 多氯联苯对微生物转录组的影响
1.3 细菌气囊蛋白
1.3.1 气囊蛋白分类
1.3.2 气囊结构蛋白 GvpA和GvpC的结构
1.3.3 气囊蛋白的功能
1.3.4 气囊蛋白研究进展
1.4 细胞分裂蛋白FtsZ
1.5 本课题研究目的和意义
参考文献
第二章 联苯/PCB对红球菌RO4细胞形态及分裂的影响
2.1 材料
2.1.1 菌株、培养基和生长条件
2.1.2 主要的酶和化学试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 生物量试验
2.2.2 红球菌细胞形态学显微镜观察
2.2.3 cDNA的获得
2.2.4 实时荧光PCR
2.2.5 荧光光谱分析
2.2.6 极化实验
2.3 结果与讨论
2.3.1 Bp/PCB对红球菌R04生长的影响
2.3.2 联苯对红球菌细胞形态及分裂的影响
2.3.3 联苯对红球菌细胞膜着色荧光强度的影响
2.3.4 红球菌细胞膜的极化值
2.4 小结
参考文献
第三章 红球菌R04气囊蛋白GvpA与GvpJ的定位
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 气囊结构蛋白gvpA与gvpJ基因的克隆和鉴定
3.1.3 蛋白的诱导表达
3.1.4 荧光显微镜观察
3.2 结果
3.2.1 气囊结构蛋白GvpA、GvpJ及绿色荧光蛋白的表达
3.2.2 气囊结构蛋白的定位
3.3 讨论
3.4 结论
参考文献
第四章 红球菌R04气囊蛋白的表达
4.1 材料和方法
4.1.1 菌株和生长条件
4.1.2 培养基
4.1.3 主要化学试剂和仪器设备
4.1.4 静息细胞的制备
4.1.5 红球菌R04的培养
4.1.6 总RNA的分离
4.1.7 总RNA的纯度检测
4.1.8 cDNA的获得
4.1.9 实时荧光PCR
4.2 结果与讨论
4.2.1 红球菌R04总RNA的分离
4.2.2 RT-PCR结果
4.3 结论
参考文献
第五章 红球菌气囊蛋白生理功能的初步探究
5.1 材料
5.1.1 菌株与质粒
5.1.2 主要的酶和化学试剂
5.1.3 主要培养基
5.1.4 主要仪器设备
5.2 方法
5.2.1 红球菌的培养
5.2.2 红球菌细胞形态显微镜观察
5.2.3 气囊蛋白缺陷基因载体的构建
5.2.4 红球菌电转感受态的制备
5.2.5 气囊蛋白GvpA的基因敲除
5.3 结果与讨论
5.3.1 红球菌R04的培养及静置
5.3.2 红球菌细胞形态
5.3.3 气囊蛋白GvpA缺陷型载体的制备
5.3.4 红球菌气囊蛋gvpA基因的同源重组
5.4 结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3861966
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 多氯联苯的危害
1.2 多氯联苯对微生物转录组的影响
1.3 细菌气囊蛋白
1.3.1 气囊蛋白分类
1.3.2 气囊结构蛋白 GvpA和GvpC的结构
1.3.3 气囊蛋白的功能
1.3.4 气囊蛋白研究进展
1.4 细胞分裂蛋白FtsZ
1.5 本课题研究目的和意义
参考文献
第二章 联苯/PCB对红球菌RO4细胞形态及分裂的影响
2.1 材料
2.1.1 菌株、培养基和生长条件
2.1.2 主要的酶和化学试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 生物量试验
2.2.2 红球菌细胞形态学显微镜观察
2.2.3 cDNA的获得
2.2.4 实时荧光PCR
2.2.5 荧光光谱分析
2.2.6 极化实验
2.3 结果与讨论
2.3.1 Bp/PCB对红球菌R04生长的影响
2.3.2 联苯对红球菌细胞形态及分裂的影响
2.3.3 联苯对红球菌细胞膜着色荧光强度的影响
2.3.4 红球菌细胞膜的极化值
2.4 小结
参考文献
第三章 红球菌R04气囊蛋白GvpA与GvpJ的定位
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 气囊结构蛋白gvpA与gvpJ基因的克隆和鉴定
3.1.3 蛋白的诱导表达
3.1.4 荧光显微镜观察
3.2 结果
3.2.1 气囊结构蛋白GvpA、GvpJ及绿色荧光蛋白的表达
3.2.2 气囊结构蛋白的定位
3.3 讨论
3.4 结论
参考文献
第四章 红球菌R04气囊蛋白的表达
4.1 材料和方法
4.1.1 菌株和生长条件
4.1.2 培养基
4.1.3 主要化学试剂和仪器设备
4.1.4 静息细胞的制备
4.1.5 红球菌R04的培养
4.1.6 总RNA的分离
4.1.7 总RNA的纯度检测
4.1.8 cDNA的获得
4.1.9 实时荧光PCR
4.2 结果与讨论
4.2.1 红球菌R04总RNA的分离
4.2.2 RT-PCR结果
4.3 结论
参考文献
第五章 红球菌气囊蛋白生理功能的初步探究
5.1 材料
5.1.1 菌株与质粒
5.1.2 主要的酶和化学试剂
5.1.3 主要培养基
5.1.4 主要仪器设备
5.2 方法
5.2.1 红球菌的培养
5.2.2 红球菌细胞形态显微镜观察
5.2.3 气囊蛋白缺陷基因载体的构建
5.2.4 红球菌电转感受态的制备
5.2.5 气囊蛋白GvpA的基因敲除
5.3 结果与讨论
5.3.1 红球菌R04的培养及静置
5.3.2 红球菌细胞形态
5.3.3 气囊蛋白GvpA缺陷型载体的制备
5.3.4 红球菌气囊蛋gvpA基因的同源重组
5.4 结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3861966
本文链接：https://www.wllwen.com/shengtaihuanjingbaohulunwen/3861966.html
