骨形态发生蛋白对永生化成牙本质样细胞成骨分化作用的研究

发布时间：2020-12-06 05:13

　　目的:研究永生化成牙本质样细胞（immortalized odontoblastlike cells,iODs）的间充质干细胞表型和骨形态发生蛋白（Bone m orphogenetic protein,BMP）-2,-4,-6,-7和-9对iODs成骨分化的作用。方法:使用iODs模拟成牙本质样细胞（Odontoblast-like cells,ODs）应用于实验。使用半定量RT-PCR（Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction）连续检测iODs中BMPs的内源性表达。使用MTT试剂盒检测iODs的增殖能力。通过流式细胞术分析iODs的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）表面标志物。重组腺病毒介导的BMP（Ad-BMP）和绿色荧光蛋白（Ad-Green Fluorescent Protein,Ad-GFP）转染iODs。在体外,使用半定量RT-PCR、碱性磷酸酶活性、茜素红染色及油红O染色测定检测iODs的成骨和成脂分化能力。最后,使用micro-CT和组织学分析评估了体内形成的异位矿化组织的体积和密... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

成牙本质样细胞和永生化牙本质细胞形态学和增殖能力A:形态学；B:结晶紫染色；C:MTT试验

重庆医科大学硕士研究生学位论文检测结果显示：CD 73 阳性率为 95.65%，CD 90 阳性率为 99.59%，CD 105 阳性率为 28.12%，Nestin 阳性率为 66.12%, CD 31 为阴性表达（图 2）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文24由于iODs表达MSC表面标志物，因此假设其具有间充质干细胞的多向分化能力，包括具分化为成骨细胞，脂肪细胞和成软骨细胞的潜能。用Ad-BMPs或Ad-GFP感染iODs，然后通过半定量RT-PCR检测分析了成骨分化标志物（包括OPN、OCN、BSP、MEPE和DMP1）和作为成骨抑制因子的Smad6的表达。在Ad-BMPs或Ad-GFP感染iODs的第3、5、7天，iODs中OPN、OCN、BSP、MEPE和DMP1均被BMPs上调。作为成骨抑制因子的Smad6，可以通过与Smad4竞争受体激活的Smad1、5和8参与抑制BMP信号通路，在第3天被BMPs上调，但在第5、7天被BMP下调（图3A）。图3iODs中BMP的内源表达和iODs在BMP刺激下成骨相关基因表达A.BMPs刺激iODs后OPN、OCN、BSP、MEPE、DMP1和Smad6表达；B.iODs的BMPs内源性表达Figure3EndogenousexpressionofBMPsiniODsandosteogenicgenesexpressionafteriODsstimulatedbyBMPs.A.ExpressionofOPN,OCN,BSP,MEPE,DMP1andSmad6afteriODsstimulatedbyBMPs;B.EndogenousexpressionofBMPsiniODs通过ALP染色和定量分析评估BMPs对iODs早期矿化能力增强的作用。ALP染

【参考文献】：
期刊论文
[1]Use of bone morphogenetic proteins in mesenchymal stem cell stimulation of cartilage and bone repair[J]. Sonia Scarfì.  World Journal of Stem Cells. 2016(01)



本文编号：2900790