人脱落乳牙牙髓干细胞来源外泌体调节骨髓间充质干细胞生物学特性及其在骨缺损修复中的研究
发布时间：2020-12-02 10:52
目的:外泌体是细胞分泌的纳米级细胞外囊泡,是细胞间遗传物质传递的新载体,其在肿瘤标志物、癌症治疗、以及组织再生等多种病理和生理过程中起到了关键作用。脱落乳牙牙髓干细胞（Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）是一种具有高增殖、多潜能分化能力且容易获得的干细胞,其来源的细胞外囊泡如外泌体研究较少。因此,本研究利用人脱落乳牙牙髓干细胞来源的外泌体（SHED-Exos）探究其在牙周炎小鼠体内的成骨效果和调节骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的体外成骨分化能力,为脱落乳牙牙髓干细胞来源的外泌体促进骨再生提供研究参考。方法:1.外泌体收集:SHED培养至第4-7代,收集细胞培养液,采用30%蔗糖垫超速离心法提取SHED-Exos,使用透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）观察SHED-Exos的形态特征,利用蛋白质印迹法（Western blot）对表面标记物CD63进行鉴定;2.BMSCs培养及生物学特性检测（...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜观察SHED形态特征（物镜20×，标尺：50μm）
山西医科大学硕士学位论文72结果2.1SHED形态学特征培养SHEDP4-P7，发现细胞在培养皿底部贴壁生长，增长速度稳定，并保持大小均匀的梭形或纺锤状形态（图1）。图1显微镜观察SHED形态特征（物镜20×，标尺：50μm）2.2SHED-ExosTEM结果TEM检测显示提取的SHED-Exos是直径范围小于100nm的球性膜包裹结构（图2），符合外泌体直径范围为30-150nm囊泡的形态特征[8]。图2透射电子显微镜观察SHED-Exos形态（标尺：100nm）
山西医科大学硕士学位论文82.3SHED-ExosWesternblot结果CD63属于四次跨膜蛋白成员，产生于细胞中，定位于膜结构附近，参与外泌体囊泡的形成和分泌过程[9]。GM130是高尔基体基质蛋白，参与细胞周期、细胞极化和细胞定向迁移等过程[10]。Westernblot结果显示SHED-ExosCD63表达呈阳性，而GM130和Gapdh表达均呈阴性（图3）。图3Westernblot检测SHED、SHED-Exos和SHED-CM中GM130、CD63蛋白表达水平
【参考文献】：
期刊论文
[1]树突状细胞外泌体诱导间充质干细胞向成骨细胞分化[J]. 王姿,丁丽,郑晓丽,王恒湘,闫洪敏. 中国实验血液学杂志. 2014(03)
本文编号：2895191
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜观察SHED形态特征（物镜20×，标尺：50μm）
山西医科大学硕士学位论文72结果2.1SHED形态学特征培养SHEDP4-P7，发现细胞在培养皿底部贴壁生长，增长速度稳定，并保持大小均匀的梭形或纺锤状形态（图1）。图1显微镜观察SHED形态特征（物镜20×，标尺：50μm）2.2SHED-ExosTEM结果TEM检测显示提取的SHED-Exos是直径范围小于100nm的球性膜包裹结构（图2），符合外泌体直径范围为30-150nm囊泡的形态特征[8]。图2透射电子显微镜观察SHED-Exos形态（标尺：100nm）
山西医科大学硕士学位论文82.3SHED-ExosWesternblot结果CD63属于四次跨膜蛋白成员，产生于细胞中，定位于膜结构附近，参与外泌体囊泡的形成和分泌过程[9]。GM130是高尔基体基质蛋白，参与细胞周期、细胞极化和细胞定向迁移等过程[10]。Westernblot结果显示SHED-ExosCD63表达呈阳性，而GM130和Gapdh表达均呈阴性（图3）。图3Westernblot检测SHED、SHED-Exos和SHED-CM中GM130、CD63蛋白表达水平
【参考文献】：
期刊论文
[1]树突状细胞外泌体诱导间充质干细胞向成骨细胞分化[J]. 王姿,丁丽,郑晓丽,王恒湘,闫洪敏. 中国实验血液学杂志. 2014(03)
本文编号：2895191
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