辽宁碱蓬S/NAC4、S/NAC10转录因子基因克隆及功能分析

发布时间：2021-08-05 17:47

　　NAC转录因子,植物特有的转录调控因子,对植物的器官建成、生长发育以及抵御胁迫等方面都发挥着至关重要的作用。对NAC转录因子的研究,有助于理解植物的抗逆机制,并为抗逆作物培育奠定基础。本文从辽宁碱蓬转录组数据库中选择两个带有NAC结构域的EST序列,命名SlNAC4、SlNAC10,克隆cDNA全长序列并进行功能分析,主要结果及结论如下:根据已知EST序列,RACE技术获得了SlNAC4/10 cDNA全长。SlNAC4（GenBank登录号:KJ933531）全长1450 bp,编码331个氨基酸;SlNAC10（GenBank登录号:KJ933532）全长1584 bp,编码369个氨基酸。生物信息分析显示,两基因N端都有NAC结构域,C端差异较大。NCBI在线Blast比对及构建进化树显示,SlNAC4与Th NAC1相似度较高,SlNAC10与AtNAC19、AtNAM和AtATAF具有较高相似性,查阅文献,推测SlNAC4、SlNAC10与非生物胁迫应答有关,SlNAC4为NAP亚家族,SlNAC10为NAM亚家族。qRT-PCR方法分析了SlNAC4和SlNAC10基因在辽... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 胁迫
    1.2 转录因子
        1.2.1 转录因子的结构
        1.2.2 转录因子的分类
        1.2.3 转录因子的研究方法
    1.3 NAC转录因子
        1.3.1 NAC转录因子的结构
        1.3.2 NAC转录因子的功能
        1.3.3 NAC转录因子的研究现状及展望
    1.4 辽宁碱蓬
    1.5 研究目的及意义
    1.6 本研究的技术路线
2 SlNAC4、SlNAC10基因克隆及生物信息学分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和质粒
        2.1.3 试剂
        2.1.4 培养基
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 SlNAC4、SlNAC10基因cDNA全长的获得
        2.2.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息学分析
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 SlNAC4、SlNAC10基因全长的获得
        2.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息学分析
    2.4 讨论
3 SlNAC4、SlNAC10基因表达特性分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 仪器设备
        3.1.4 引物
    3.2 实验方法
        3.2.1 辽宁碱蓬幼苗培养及非生物胁迫处理
        3.2.2 总RNA的提取及检测
        3.2.3 反转录成cDNA
        3.2.4 实时荧光定量PCR
    3.3 实验结果
        3.3.1 辽宁碱蓬总RNA的提取
        3.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因在辽宁碱蓬中的表达特异性
    3.4 讨论
4 SlNAC4、SlNAC10亚细胞定位分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 仪器设备
        4.1.4 引物
    4.2 实验方法
        4.2.1 亚细胞定位载体的构建
        4.2.2 洋葱表皮细胞转化
        4.2.3 洋葱表皮细胞镜检
    4.3 实验结果
        4.3.1 亚细胞定位载体的构建
        4.3.2 亚细胞定位
    4.4 讨论
5 SlNAC4、SlNAC10转录激活作用分析
    5.1 实验材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 相关溶液的配制
        5.1.4 设备仪器
        5.1.5 引物
    5.2 实验方法
        5.2.1 酵母表达载体构建
        5.2.2 制备酵母菌感受态细胞
        5.2.3 阳性质粒转化酵母菌
        5.2.4 β-半乳糖苷酶活性检测
    5.3 实验结果
        5.3.1 酵母表达载体的构建
        5.3.2 转录激活作用分析
    5.4 讨论
6 SlNAC4、SlNAC10基因转化拟南芥及转基因拟南芥抗逆性分析
    6.1 实验材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 实验试剂
        6.1.3 仪器设备
        6.1.4 引物
    6.2 实验方法
        6.2.1 植物表达载体的构建
        6.2.2 农杆菌转化拟南芥
        6.2.3 阳性拟南芥的筛选
        6.2.4 转基因拟南芥半定量RT-PCR分析
        6.2.5 转基因拟南芥的抗性分析
    6.3 实验结果
        6.3.1 植物表达载体的构建
        6.3.2 转基因拟南芥的筛选
        6.3.3 外源基因在转基因拟南芥半中的表达
        6.3.4 转基因拟南芥的胁迫分析
    6.4 讨论
结论
参考文献
附录A 培养基
附录B 载体
附录C Marker
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物非生物胁迫相关转录因子研究方法[J]. 宿明星,孙颖颢,施鹤,李秋莉.  生物技术通报. 2015(01)
[2]植物NAC转录因子的研究进展[J]. 康桂娟,曾日中,聂智毅,黎瑜,代龙军,段翠芳.  生物技术通报. 2012(11)
[3]NAC转录因子在植物抗病和抗非生物胁迫反应中的作用[J]. 孙利军,李大勇,张慧娟,宋凤鸣.  遗传. 2012(08)
[4]植物NAC转录因子家族研究概况[J]. 彭辉,于兴旺,成慧颖,张桦,石庆华,李建贵,麻浩.  植物学报. 2010(02)
[5]植物NAC转录因子的研究进展[J]. 冶晓芳,唐益苗,高世庆,杨颖,刘美英,王永波,赵昌平.  生物技术通报. 2009(10)
[6]植物转录因子与基因调控[J]. 李洁.  生物学通报. 2004(03)
[7]植物转录因子的结构与调控作用[J]. 刘强,张贵友,陈受宜.  科学通报. 2000(14)
[8]植物转录因子的结构与功能[J]. 陈丽.  植物生理学通讯. 1997(06)



本文编号：3324190