Rbm24a通过胞质多腺苷酸化在斑马鱼晶状体中调控crystallin mRNA的poly（A）尾长度和翻译效率

发布时间：2022-12-11 19:33

　　脊椎动物的眼睛在发育过程中会形成透明的晶状体结构,晶状体能够有效地折射光线来保证动物感知外界信息。晶状体的透明化依赖于晶状体纤维细胞中细胞器特别是细胞核的降解以及晶体蛋白（crystallin）的大量积累,该过程发生紊乱有可能导致晶状体浑浊,即白内障的发生,这是造成人类失明的主要原因。由于在晶状体分化过程中细胞核的退化降解阻碍了 mRNA的持续转录,因此晶体蛋白的大量积累必然伴随着其mRNA的高效翻译以补偿转录层面的损失,因此晶状体终末分化过程中的转录后调控机制显得尤其重要。然而调控晶状体特异mRNA高效翻译的转录后调控机制在这之前研究的尚不清楚。本研究发现一种RNA结合蛋白（RBP）,Rbm24a,其特异表达在正在分化的纤维细胞中,是晶体蛋白积累和晶状体纤维细胞终末分化的关键因子。在斑马鱼系统中敲除该基因会导致严重的白内障表型。在晶状体形成的过程中,Rbm24a通过其N端的RNA识别基序（RRM）与多种晶状体特异mRNA结合,并且通过其C端与胞质多腺苷酸化元件结合蛋白Cpeblb和poly（A）结合蛋白Pabpc11相互作用。Rbm24a的缺失会降低热休克蛋白（hsp）mRNA的稳定... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文说明
第一部分 斑马鱼晶状体的形成过程
    1.1 斑马鱼是一种重要的模式生物
    1.2 晶状体的形成过程
    1.3 晶体蛋白crystallin是晶状体特异蛋白的主要组分
    1.4 Rbm24a参与晶状体的形成过程
第二部分 Rbm24a参与crystallin转录后调控参与晶状体发育
    2.1 rbm24a在斑马鱼晶状体正在分化的纤维细胞中表达
    2.2 rbm24a合子突变体表现出白内障表型
    2.3 为突变体恢复血液循环不能拯救白内障表型
    2.4 晶体蛋白mRNA总量在rbm24a突变体中受到不同程度的影响
    2.5 Rbm24a通过RRM与多种晶状体表达的mRNA结合
    2.6 缺失Rbm24a降低crystallin mRNA的稳定性
    2.7 Rbm24a是crystallin蛋白积累所必需的
    2.8 Rbm24a与胞质多腺苷酸化复合物因子Pabpc11和Cpeb1b互作
第三部分 实验总结与展望
第四部分 实验方法与材料
    4.1 伦理声明
    4.2 斑马鱼及幼鱼的养殖
    4.3 转基因品系的制备
    4.4 表达载体的构建
    4.5 Gibson连接
    4.6 胚胎融合
    4.7 胚胎移植
    4.8 RIP-qPCR
    4.9 探针的获取
    4.10 原位杂交
    4.11 WB
    4.12 co-IP
    4.13 JB4切片
    4.14 CRISPR/Cas9基因敲除
    4.15 Poly(A)尾长分析
    4.16 Phalloidin和Hoechst染色
    4.17 共聚焦反射模式拍摄
    4.18 放线菌素D处理
    4.19 qRT-PCR
参考文献
致谢
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本文编号：3719370