基于共培养体系控释TGF-β3对ATDC5细胞软骨分化影响的实验研究

发布时间：2024-03-06 23:59

　　研究目的:将不同比例的ATDC5细胞与已被腺病毒转染的软骨细胞构建共培养体系,软骨细胞为ATDC5提供TGF-β3,评估这个共培养体系对于促进ATDC5细胞向软骨分化的影响,为其将来应用于软骨的修复提供实验基础。方法:一、细胞收集、培养原代软骨细胞需从新鲜猪软骨中提取,然后经体外培养传至第三代后冻存备用。ATDC5细胞购自美国Abgent公司,用ATDC5培养基在150cm²培养瓶中培养。HEK-293细胞购自American type culture collection(ATCC),用HEK-293培养基在75cm²培养瓶中培养。二、扩增腺病毒、提纯及测定滴度在之前的研究中已构建好了Ad-T,将其转染HEK-293细胞进行扩增,然后进行提纯及测定滴度。三、构建海藻酸盐水凝胶三维共培养体系将腺病毒转染P4软骨细胞,然后按1:1及3:1的比例将ATDC5和软骨细胞混合(分别为命名为1A1C及3A1C)。另外再建立两对照组(A组),均以单独的ATDC5细胞构成,其中一对照组在培养基中加入外源性的TGF-β3(ArT组)。上述4组细胞收集后在海藻...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1软骨细胞显微镜下观察结果

第一章原代软骨细胞的提娶培养及ATDC5细胞的培养1015mlATDC5培养基（94%F-12培养基，5%胎牛血清，1%青霉素/链霉素）。将培养瓶放入培养箱，每3天换一次培养基，观察细胞形态，当融合度达80-90%时进行细胞传代，将细胞扩增至足够数量后冻存备用。4、利用光学显微镜....

图2ATDC5细胞显微镜下观察结果

广州医科大学硕士学位论文112、ATDC5细胞培养过程中利用光学显微镜对其形态、生长状态进行观察（图2）。从图2可见其细胞呈小圆形，形态均匀，生长迅速，培养5天融合度可达80-90%。图2ATDC5细胞显微镜下观察结果。A为第1天的，见细胞贴壁生长，呈长梭形；B为第3天，细胞生长....

图3HEK-293细胞显微镜下观察结果

广州医科大学硕士学位论文15（5）将24孔板放入细胞培养箱，在37℃，5%CO2的培养环境下孵育48小时；（6）荧光显微镜观察细胞荧光数；用20倍物镜观察适合稀释倍数的孔中五个区域荧光细胞的数量，然后计算荧光细胞的平均数（合适的稀释倍数为视野内约有10%范围有荧光细胞，合适区域为....

图4腺病毒转染HEK-293细胞24小时后

第二章携带TGF-β3基因腺病毒的扩增、提纯及滴度测定16图4腺病毒转染HEK-293细胞24小时后。HEK-293细胞可见到明显的绿色荧光（比例尺：500μm）。3、腺病毒滴度的测定提纯腺病毒后，测定其滴度。用腺病毒转染24孔板中的HEK-293细胞，观察孔板中发绿色荧光的细胞....

本文编号：3921073