建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系

发布时间：2024-05-11 00:11

　　小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)是一种来源于3.5天囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM)的多能性干细胞,具有无限自我更新能力。自从1981年第一次建立小鼠ESCs以来,ESCs体外培养体系一直是科学研究的热点之一。2008年科研人员开发化学成分明确的2i/LIF(Mek1/2和Gsk3b的抑制剂,简称2i;LIF:白血病抑制因子)培养体系。该培养体系主要通过调节经典的WNT、FGF/ERK和JAK/STAT3等信号通路来维持小鼠ESCs的na?ve多能性,但是这三种小因子中的某一种成分可以维持小鼠ESCs的自我更新和na?ve多能性并不清楚。在这里,我们主要研究应用LIF能否建立L-ESCs细胞系,并鉴定其细胞的特性。首先在2i/LIF培养体系中去掉2i,观察单独使用LIF能否维持小鼠ESCs多能性,其次建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系,我们将其命名为L-ESCs,对其细胞特性、多能性、体外分化和体内发育潜能等方面进行鉴定。实验结果如下:1.建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系本实验用LIF培养体系对6种2i/LIF培养的ESC...

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【部分图文】：

图1.1LIF信号通路作用机制

内蒙古大学硕士学位论文5配体结合结构域所组成的融合蛋白，融合蛋白的配体三苯氧胺(Tx)激活雌激素受体后，在STAT3不被磷酸化的情况下，融合蛋白转移到细胞核。另一方面，来自嵌合受体GCSFR-Gp130，它在Gp130的Shp2对接位点(Y118F)发生突变，激活JAK-STAT....

图1.2经典WNT信号通路作用机制Figure1.2MechanismofCanonicalWNTsignalingpathway

内蒙古大学硕士学位论文7Stat3的消融导致后期囊胚的外胚层和原始内胚层细胞的丢失。表明在胚胎着床前发育过程中，Stat3对于维持多能性细胞的数量至关重要。在LIF缺失的囊胚中，Y705残基磷酸化的Stat3减少，尽管没有完全消除，这表明LIF信号参与了Stat3的激活，这些数据....

图2.1用2i/L-ESCs向L-ESCs诱导建系流程

建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系162.3实验结果2.3.1小鼠L-ESCs细胞形态学鉴定我们使用的2i/L-ESCs细胞系均是由本实验室建立并带有Oct4-GOF/GFP标记。在小鼠胚胎干细胞及原始生殖细胞（PGCs）中，Oct4远端启动子被激活，在倒置荧光显微镜下能够观察....

图2.22i/L-ESCs和L-ESCs细胞形态（标尺：100μm）

内蒙古大学硕士学位论文

本文编号：3969229