无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究

发布时间：2020-04-24 15:18

【摘要】：禽流感不仅危害养殖业,造成大量经济损失,还严重威胁着人类生命健康,接种疫苗是目前最有效的预防手段。禽流感疫苗长期使用鸡胚生产,存在诸多弊端。动物细胞培养方式因其优势显著,逐渐在国际上得到认可。其中无血清悬浮培养易于放大、实现高密度培养,且成本较低、稳定性高,是流感疫苗生产的主要方向。目前我国市场上还没有用无血清悬浮培养细胞生产H9亚型禽流感疫苗的产品,亟需对该工艺过程进行研究,建立高病毒产量、适合工业化生产的工艺。本文从批培养和离心换液两种极端的工艺入手,分析二者产毒差异大的主要原因是营养物质、代谢副产物和环境三方面条件的不同。离心工艺滴度高,但实际生产中不易实现,本文以两种工艺的差异为指导,改进批培养工艺,提高产毒量。对于批培养工艺缺乏营养的问题,在批培养工艺基础上添加各种营养物质探究能否提升产毒量。结果表明,单独添加葡萄糖或谷氨酰胺不能提高病毒产量;流加浓缩培养基,病毒滴度可达到2~(10.3)HAU/25μl,但工艺复杂;稀释流加原培养基,可达到2~(9.0)HAU/25μl,工艺简洁,但还可以通过调节工艺参数进一步提高滴度。对于批培养工艺代谢副产物积累的问题,在离心换液保证营养充足的条件下添加代谢副产物乳酸或铵,探究代谢副产物对病毒生产的影响。结果表明接毒时40 mM以内的乳酸物质或8 mM以内的铵,其物质本身都不影响产出病毒的最大滴度。对于批培养和离心工艺产毒期环境不同的问题,优化产毒期pH和温度。结果发现pH≤6.0会导致HA滴度下降,产毒期pH控制在7.0±0.2为宜,且适当降低温度(30℃-35℃)有利于产毒。综合对上述条件的探究,本文建立了稀释流加降温工艺。经反应器验证,HA滴度可达到2~(10.6±0.2) HAU/25μl,单细胞产毒量为(16060±786)virions/cell,超过离心工艺水平。该工艺简洁高效,为流感疫苗工业化生产提供了基础数据支持。
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：TQ460.6

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;埃及新禽流感疫苗将正式投产[J];北方牧业;2012年13期

2 边择;;哪里生产禽流感疫苗[J];新农业;2006年02期

3 ;我国禽流感疫苗实现产业化[J];动物保健;2006年10期

4 姚润丰;;我国禽流感疫苗实现产业化 挽回经济损失318亿元[J];中国家禽;2006年19期

5 赵殿国;王健中;;食用注射禽流感疫苗后的禽肉是否安全[J];现代畜牧兽医;2005年12期

6 ;中国有9家企业有资格生产禽流感疫苗[J];饲料工业;2005年23期

7 ;我国禽流感疫苗研制成功并广泛使用[J];食品工业科技;2005年03期

8 ;我国H5N1禽流感疫苗研究取得新突破[J];中国食品学报;2014年07期

9 林春驿;农业部再次重申只有九家企业生产的禽流感疫苗为正规疫苗[J];畜牧兽医科技信息;2005年11期

10 栾雪梅;;研发[J];中国处方药;2008年04期

相关会议论文 前10条

1 许傲天;吴磊;马君;;禽流感疫苗的研究进展[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

2 罗月波;罗小平;罗涛;庄庆均;;对綦江县产蛋鸡禽流感H5免疫的一些建议[A];第七届重庆市饲料工业发展战略研讨会暨第八届饲料工业协会会员大会论文集[C];2010年

3 杨松全;吴登虎;姚勇;滕明生;杨晓黎;潘永全;;孔雀免疫禽流感重组活疫苗的血清学效果观察[A];第四届中国畜牧科技论坛论文集[C];2009年

4 肖金东;杨秀环;;不同种家禽红细胞对水禽禽流感抗体效价的影响[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年

5 徐守荣;林金杏;李国强;;宁海土鸡禽流感抗体消长规律的研究[A];首届中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2008年

6 陈瑞爱;温志芬;唐满华;潘洪波;;禽流感灭活油乳剂苗不同免疫剂量的免疫效力比较[A];家禽研究最新进展——第十一次全国家禽学术讨论会论文集[C];2003年

7 张成莲;;鸡场禽流感免疫抗体监测与分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集[C];2012年

8 张济培;陈建红;刘佑明;张福英;廖洁丹;陈冈;刘少彬;何镇;;蜂-灵散对不同水禽禽流感疫苗免疫促进效果的比较[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

9 朱凤先;荆汝顶;郝付全;卢晓辉;宋予震;;禽流感与新城疫鉴别诊断[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年

10 朱方兵;宋予震;董青;朱魁元;朱凤先;;鸡禽流感抗体监测分析与防范[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

相关重要报纸文章 前10条

1 关轶男 记者 彭溢;禽流感疫苗出口走绿色通道[N];黑龙江日报;2005年

2 记者 孙志刚 通讯员 李一新 郭启祥;郑州禽流感疫苗首次出口印尼[N];郑州日报;2005年

3 葛文斌;红星农场三项措施预防禽流感[N];黑龙江经济报;2006年

4 记者　 董映璧;俄将研制口服抗禽流感疫苗[N];科技日报;2006年

5 金海;杨凌造禽流感疫苗问世[N];陕西科技报;2006年

6 万丰 谢宗博 高铁彬;紧急拨经费 严防禽流感[N];中国财经报;2005年

7 毛立军;市场上出现假冒伪劣禽流感疫苗[N];人民政协报;2004年

8 记者 刘翔霄;越南禽流感疫苗将试验人体接种[N];新华每日电讯;2005年

9 记者 王漪;我国人用禽流感疫苗获批[N];北京商报;2009年

10 ;加强禽流感疫苗监督管理[N];湖北日报;2004年

相关博士学位论文 前1条

1 金荣仲;应用家蚕杆状病毒表面展示技术生产人用禽流感疫苗的研究[D];浙江大学;2008年

相关硕士学位论文 前3条

1 彭雯娟;无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究[D];华东理工大学;2017年

2 杨炳飞;重组大流行流感疫苗的构建及制备工艺研究[D];浙江理工大学;2011年

3 赵娜;鸡白细胞介素-6在毕赤酵母中的表达及生物活性检测[D];扬州大学;2013年

，

本文编号：2639102