野桂花蜜多酚的提取分离及抗氧化性研究

发布时间：2017-07-31 13:30

  本文关键词：野桂花蜜多酚的提取分离及抗氧化性研究

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【摘要】：本文选取天然野桂花蜜为原料,利用响应面实验确立野桂花蜜中酚类化合物的最佳提取方法及条件,通过大孔树脂以及聚酰胺树脂对野桂花蜜多酚的粗提物进行分离纯化,采用HPLC对各个提取分离阶段野桂花蜜多酚中的14种单酚含量进行定性和定量的分析。并在此基础上对不同分离阶段的野桂花蜜多酚提取液进行了抗氧化作用的初步研究,具体研究内容和结果如下：1、用单因素实验和响应面法优化实验对野桂花蜜多酚的超声波辅助溶剂提取进行了研究,研究结果表明：使用盐酸-乙酸乙酯复合溶剂,浓度为62%,料液比为1：10(m/v),超声波时间为21 min,超声波温度为54℃,在此工艺条件下,得到的野桂花蜜多酚的平均得率为68.27 mg/10g。然后用传统有机溶剂浸提工艺对其进行对比研究,发现超声波辅助提取野桂花蜜多酚的得率较高,更适合野桂花蜜多酚的提取。2、比较了4种不同大孔树脂纯化野桂花蜜多酚方面的特性。实验表明：XAD-2树脂纯化野桂花蜜多酚的效果最好；XAD-2树脂的吸附量为36.9±1.26 mg/g,解析率为7812±1.17%,并且达到吸附平衡与解析平衡的时间较短,较适合野桂花蜜多酚的纯化。最佳工艺参数为样液多酚浓度2.5 mg/mL、最适宜pH为6,上样流速2 BV/h、洗脱剂为80%乙醇溶液、洗脱流速2 BV/h、洗脱剂用量4 BV。在此条件下,野桂花蜜多酚的纯度由9.52%提高到52.8%。通过XAD-2大孔树脂初步纯化结合聚酰胺树脂进一步分离,经过测定后,制备样品中的野桂花蜜多酚得到较大程度富集,野桂花蜜多酚的纯度提高到84.55%。3、通过HPLC分析,确定了的13种野桂花蜜多酚的组分含量,其中芦丁(276.68±0.43 mg/10g)为主要成分,含量最高,肉桂酸(141.16±1.29 mg/10g)次之。芹菜素(2.47±0.03 mg/10g)含量相对较低。实验结果表明乙酸乙酯的萃取过程、XAD-2树脂和聚酰胺树脂的纯化过程并不影响野桂花蜜多酚的组成。4、比较了四个分离提取阶段的四组试样中的总酚含量与其抗氧化活性。证明了不同组分的总酚含量、还原能力以及其抗氧化能力不同,其总酚含量与还原能力呈正相关,野桂花蜜多酚对DPPH自由基、超氧阴离子和羟基自由基均具有一定的清除能力。研究结果表明野桂花蜜多酚具有很好的体外抗氧化活性。
【关键词】：野桂花蜜多酚 超声波提取 分离纯化 HPLC 抗氧化活性
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TQ28
【目录】：

• 摘要4-5
• abstract5-12
• 第一章 绪论12-26
• 1 蜂蜜的研究现状12-14
• 1.1 蜂蜜的成分研究12-13
• 1.2 野桂花蜜的简介13
• 1.3 野桂花蜜的抗氧化活性成分13-14
• 2 蜂蜜多酚的概述14-17
• 2.1 多酚的结构及分类14-15
• 2.2 蜂蜜多酚化合物的生物活性15-16
• 2.2.1 抗氧化能力15
• 2.2.2 预防心脑血管疾病15
• 2.2.3 抑菌消炎、抗肿瘤作用15
• 2.2.4 治疗肠胃疾病15-16
• 2.2.5 美容和抗衰老的功效16
• 2.2.6 其他16
• 2.3 多酚的应用现状16-17
• 3 多酚化合物提取方法17-19
• 3.1 有机溶剂提取法17
• 3.2 超声波辅助提取17-18
• 3.3 微波辅助萃取18
• 3.4 超临界流体萃取18
• 3.5 固相萃取技术18
• 3.6 酶提取方法18-19
• 4 多酚类物质纯化方法研究现状19-20
• 4.1 柱层析19
• 4.2 薄层层析19-20
• 4.3 膜分离法20
• 4.4 高效液相色谱法20
• 5 多酚类物质成分分析方法研究现状20-22
• 5.1 紫外-可见光吸收光谱法20-21
• 5.2 红外吸收光谱法21
• 5.3 高效液相色谱21
• 5.4 核磁共振21-22
• 5.5 液-质联用技术22
• 6 测定多酚类物质抗氧化能力的研究现状22-24
• 6.1 DPPH自由基法22-23
• 6.2 ORAC法23
• 6.3 ABTS法23
• 6.4 超氧阴离子自由基清除能力23-24
• 6.5 羟基自由基清除能力24
• 7 论文选题的目的意义24-25
• 8 研究的内容25-26
• 第二章 野桂花蜜多酚的提取工艺研究26-37
• 1 材料与方法26-28
• 1.1 材料与试剂26
• 1.2 仪器与设备26
• 1.3 方法26-28
• 1.3.1 提取溶剂的筛选26-27
• 1.3.2 原儿茶酸标准曲线的制作27
• 1.3.3 野桂花蜜多酚化合物的超声波辅助提取27
• 1.3.4 多酚化合物得率的计算27-28
• 1.3.5 单因素实验28
• 1.3.6 响应面分析实验28
• 2 结果与分析28-35
• 2.1 不同溶剂对野桂花蜜多酚提取效果的影响28-29
• 2.2 单因素实验结果29-32
• 2.2.1 溶剂浓度对野桂花蜜多酚得率的影响29
• 2.2.2 料液比对野桂花蜜多酚得率的影响29-30
• 2.2.3 超声波时间对野桂花蜜多酚的影响30-31
• 2.2.4 超声波温度对野桂花蜜多酚的影响31-32
• 2.3 响应面试验设计及结果32-34
• 2.4 响应面分析34-35
• 2.5 最佳工艺条件的验证35
• 2.6 超声波辅助提取法与传统浸提法的比较35
• 3 本章小结35-37
• 第三章 野桂花蜜多酚的纯化工艺研究37-48
• 1 材料与方法37-40
• 1.1 材料与试剂37
• 1.2 仪器和设备37-38
• 1.3 方法38-40
• 1.3.1 野桂花蜜多酚提取液的制备38
• 1.3.2 原儿茶酸标准曲线的制作38
• 1.3.3 多酚纯度的测定38
• 1.3.4 大孔吸附树脂的预处理38
• 1.3.5 大孔吸附树脂对野桂花蜜多酚吸附率和解析率的测定38-39
• 1.3.6 大孔树脂对野桂花蜜多酚的静态吸附动力学试验39
• 1.3.7 XAD-2大孔树脂纯化野桂花蜜多酚的工艺条件优化39-40
• 1.3.8 野桂花蜜多酚初步纯化物的聚酰胺树脂分离40
• 2 结果与分析40-47
• 2.1 大孔树脂的静态吸附试验40-41
• 2.2 XAD-2树脂对野桂花蜜多酚的吸附动力学特性41
• 2.3 大孔树脂纯化野桂花蜜多酚的工艺条件优化41-47
• 2.3.1 上样量浓度对纯化野桂花蜜多酚的影响41-42
• 2.3.2 不同pH值对纯化野桂花蜜多酚的影响42-43
• 2.3.3 洗脱液体积分数对纯化野桂花蜜多酚的影响43-44
• 2.3.4 上样流速对纯化野桂花蜜多酚的影响44-45
• 2.3.5 洗脱流速对纯化野桂花蜜多酚的影响45-46
• 2.3.6 洗脱量对纯化野桂花蜜多酚的影响46-47
• 2.4 各阶段样品中总酚含量和纯度的比较47
• 3 本章小结47-48
• 第四章 野桂花蜜多酚的成分分析48-58
• 1 材料与仪器48-49
• 1.1 实验材料与试剂48-49
• 1.2 仪器与设备49
• 2 实验方法49-50
• 2.1 色谱条件49
• 2.2 标准曲线的制作49
• 2.3 样品制备与测定49-50
• 2.4 精密度的考察50
• 2.5 重现性的考察50
• 2.6 加标回收率试验50
• 3 结果与分析50-56
• 3.1 标准曲线的建立50-51
• 3.2 精密度考察51
• 3.3 重现性考察51-52
• 3.4 加标回收率考察52-53
• 3.5 HPLC对野桂花蜜多酚的组分分析53-56
• 4 本章小结56-58
• 第五章 野桂花蜜多酚的抗氧化活性58-66
• 1 材料和方法58-60
• 1.1 样品采集58
• 1.2 化学试剂58
• 1.3 仪器设备58-59
• 1.4 实验方法59-60
• 1.4.1 样品处理59
• 1.4.2 总酚含量的测定59
• 1.4.3 还原性的测定59
• 1.4.4 清除DPPH·自由基能力的测定59-60
• 1.4.5 清除超氧阴离子自由基能力测定60
• 1.4.6 清除羟基自由基(·OH)的能力测定60
• 2 结果与分析60-64
• 2.1 不同试样野桂花蜜总酚含量测定60-61
• 2.2 野桂花蜜的还原性61-62
• 2.3 野桂花蜜对DPPH自由基的清除作用62-63
• 2.4 野桂花蜜对超氧阴离子自由基的清除作用63
• 2.5 野桂花蜜对羟基自由基的清除作用63-64
• 2.6 野桂花蜜多酚含量与抗氧化活性相关性分析64
• 3 本章小结64-66
• 第六章 结论与讨论66-68
• 1 结论66-67
• 2 讨论67-68
• 参考文献68-77
• 致谢77-78
• 作者简介78
• 研究生期间发表的主要论文78

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