桔霉素分子印迹仿生酶联免疫检测方法研究

发布时间：2017-08-10 05:23

  本文关键词：桔霉素分子印迹仿生酶联免疫检测方法研究

  更多相关文章： 桔霉素 分子印迹聚合物膜 仿生酶联免疫

【摘要】：本研究采用本体聚合方法以3,5-二羟基-2-萘甲酸为假模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,在酶标板孔表面直接紫外引发合成了对桔霉素分子印迹聚合物膜,成功将分子印迹技术应用于免疫分析中,建立了一种食品中桔霉素分子印迹仿生酶联免疫吸附法。研究对分子印迹膜合成参数和条件进行了详细优化,并通过扫描电镜对分子印迹膜进行了结构表征。并且,通过平衡结合实验和吸附动力学实验考察了分子印迹膜的吸附性能。实验结果表明：所合成的分子印迹聚合物膜对桔霉素具有良好的特异性吸附能力和较快的吸附速度。印迹膜饱和吸附容量达到1.07 μgwell-1,明显高于非印迹聚合物膜(0.213 μgwell-1)。当桔霉素浓度为50 mgL-1时,10 min内可达到最大吸附容量的54.9%；30 min时可达到最大吸附容量的97.3%；吸附40 min达到吸附平衡。研究以此分子印迹膜为仿生抗体,针对桔霉素建立了直接竞争仿生酶联免疫分析法。在优化的实验条件下,方法灵敏度(IC50)和最低检出限(IC15)分别达到109.20μgL-1和0.50μgL-1。对谷物中的五种生物毒素的交叉反应率均不超过4.7%。此方法被成功地应用于米饭,玉米,米醋三种样品中的桔霉素的分析检测,三个添加浓度下的回收率分别达到73.2%-89.9%,64.3-86.2%和82.3-92.8%。与高效液相色谱方法检测结果相比,检测结果具有很好的一致性,相关系数为0.9942。本研究内容为食品样品中桔霉素检测提供了一种稳定、可行、低成本的检测方法。
【关键词】：桔霉素 分子印迹聚合物膜 仿生酶联免疫
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS207.3
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-26
• 1.1 桔霉素简介9-11
• 1.1.1 桔霉素的来源及其自然分布9
• 1.1.2 桔霉素的结构和理化性质9-10
• 1.1.3 桔霉素的肾毒性10
• 1.1.4 桔霉素的致畸作用10
• 1.1.5 桔霉素的抑菌作用10-11
• 1.1.6 桔霉素在红曲菌中的部分代谢途径11
• 1.2 桔霉素的检测方法11-13
• 1.2.1 比色法11
• 1.2.2 薄层层析法11
• 1.2.3 高效液相色谱法11-12
• 1.2.4 色谱-质谱联用技术12-13
• 1.2.5 毛细管电泳法13
• 1.2.6 免疫亲和色谱法13
• 1.2.7 免疫测定方法13
• 1.3 桔霉素的控制技术13-14
• 1.4 分子印迹技术14-24
• 1.4.1 分子印迹技术概念及特点14
• 1.4.2 分子印迹技术的发展历程14
• 1.4.3 分子印迹技术的原理及制备过程14-15
• 1.4.4 分子印迹聚合物的识别机理15-16
• 1.4.5 分子印迹聚合物制备条件16-21
• 1.4.6 分子印迹聚合物的制备方法21-23
• 1.4.7 分子印迹技术的应用23-24
• 1.5 本课题研究内容及意义24-26
• 2 材料与方法26-35
• 2.1 实验材料和仪器26-28
• 2.1.1 实验材料与试剂26-27
• 2.1.2 实验仪器27
• 2.1.3 实验主要溶液的配置27-28
• 2.2 实验方法28-35
• 2.2.1 桔霉素分子印迹膜的制备28
• 2.2.2 桔霉素分子印迹聚合物膜的性能表征28-29
• 2.2.3 桔霉素酶标的连接29-31
• 2.2.4 直接竞争仿生酶联免疫吸附分析法(BELISA)建立31-32
• 2.2.5 BELISA反应体系条件的选择及优化32-33
• 2.2.6 BELISA方法在实际样品中的应用33
• 2.2.7 实际样品的准备及添加回收实验33-34
• 2.2.8 液相色谱方法验证34-35
• 3 结果与讨论35-53
• 3.1 桔霉素分子印迹聚合物的合成条件的优化35-38
• 3.1.1 假模板的选择35-36
• 3.1.2 3,5DH2NA最大吸收波长的确定以及标准曲线的绘制36-37
• 3.1.3 桔霉素最大吸收波长的确定37-38
• 3.2 桔霉素分子印迹仿生抗体的合成38-43
• 3.2.1 溶剂的选择38-39
• 3.2.2 功能单体的选择39-40
• 3.2.3 交联剂的选择40
• 3.2.4 模板分子、功能单体与交联剂配比的优化40-41
• 3.2.5 吸附介质的选择41-42
• 3.2.6 引发剂、引发方式和引发时间的确定42
• 3.2.7 模板分子的洗脱42-43
• 3.3 分子印迹聚合物膜的性能表征43-45
• 3.3.1 结构特性43-44
• 3.3.2 分子印迹聚合物膜对桔霉素的平衡结合实验44-45
• 3.3.3 分子印迹聚合物膜对桔霉素的吸附动力学实验45
• 3.4 桔霉素酶标抗原的合成45-46
• 3.5 BELISA条件优化46-47
• 3.5.1 酶标浓度的优化46-47
• 3.5.2 标样稀释液的优化47
• 3.5.3 仿生抗体包被量的优化47
• 3.6 BELISA方法的分析特征量47-49
• 3.6.1 BELISA方法的选择性47-48
• 3.6.2 仿生抗体对五种毒素的交叉反应48-49
• 3.7 样品基质影响及消除49-50
• 3.7.1 三种食品样品的检出限50
• 3.8 实际样品的添加回收实验50-51
• 3.9 BELISA方法的准确性51-53
• 4 结论53-54
• 5 展望54-55
• 6 参考文献55-65
• 7 攻读硕士期间发表论文情况65-66
• 8 致谢66

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 蔡亚岐,牟世芬;分子印迹固相萃取及其应用[J];分析测试学报;2005年05期

2 朱秀芳,侯能邦,汪国松,王颖臻,曹秋娥,丁中涛;非共价分子印迹体系的快速筛选方法[J];云南化工;2005年01期

3 闫长领;卢雁;;核-壳结构蛋白分子印迹微球的制备及性能研究[J];河南师范大学学报(自然科学版);2006年04期

4 王学军;许振良;邴乃慈;;分子印迹的印迹效率及其评价[J];化学世界;2007年04期

5 仰云峰;车爱馥;吴健;徐志康;;表面分子印迹研究进展[J];化学通报;2007年05期

6 刘伟;王兵;;氟哌酸分子印迹共混膜的制备及结构表征[J];离子交换与吸附;2009年01期

7 李琰;;量子点表面分子印迹的研究与进展[J];实验室科学;2009年02期

8 黄健祥;胡玉斐;潘加亮;许志刚;李攻科;;分子印迹样品前处理技术的研究进展[J];中国科学(B辑:化学);2009年08期

9 王斌;王榕妹;王俊卿;邓安平;;分子印迹材料研究进展[J];化学研究与应用;2010年02期

10 王红飞;张黎明;;多糖基分子印迹功能材料[J];化学进展;2010年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 郑海富;杜学忠;;含糖配体二元单层膜增强靶向蛋白识别及其生物传感:表面分子印迹[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年

2 汤又文;黄招发;杨挺;;利用分子印迹固相萃取测定人血清中的头孢硫脒[A];大环化学和超分子化学研究进展——中国化学会全国第十二届大环第四届超分子化学学术讨论会论文集[C];2004年

3 董文国;闫明;吴国是;刘铮;;溶剂对分子印迹介质吸附特性的影响:分子模拟与实验研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2004年

4 苏海佳;谭天伟;;菌丝体表面分子印迹吸附剂红外谱图的研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

5 刘俊秋;罗贵民;沈家骢;;设计高效分子印迹人工酶[A];2005年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2005年

6 伍智仲;梁坚;丁学全;潘勇;王艳武;赵建军;刘卫卫;;单[6-脱氧(1,10癸二硫醇)巯基]β-环糊精的分子印迹及应用研究[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集（下册）[C];2006年

7 周靖;侯建国;周汉坤;干宁;;基于磁性分子印迹的电化学发光免疫分析法检测艾滋病毒[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

8 陈志勇;;辅助模板法合成均匀分子印迹纳米颗粒[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

9 许秀竹;陈水挟;;罗丹明B分子印迹纤维的制备及其选择性吸附研究[A];热烈庆祝中国化学会成立80周年——中国化学会第16届反应性高分子学术研讨会论文集[C];2012年

10 卜忐忐;田园;单慧燕;胡碧炜;何娟;;氧氟沙星分子印迹固相微萃取的研制及其性能研究[A];河南省化学会2012年学术年会论文摘要集[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 经济报记者 侯力明 通讯员 张明平;“分子印迹”期待叩响产业化“大门”[N];江苏经济报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李会香;分子印迹与纳米修饰技术在生物、药物分子识别与检测中的应用基础研究[D];复旦大学;2013年

2 赵s钅，

本文编号：649044