扇贝裙边中抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺研究

发布时间：2017-08-17 02:29

  本文关键词：扇贝裙边中抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺研究

  更多相关文章： 扇贝裙边 抗氧化活性肽 牛磺酸 提取工艺

【摘要】：抗氧化活性肽是具有清除自由基能力的多肽,可以维持机体内的正常代谢,改善人体生理功能,延缓衰老,保护人体健康。与其他抗氧化剂相比,具有更强的抗氧化活性、多样性和安全性,人们对天然抗氧化肽的需求量越来越高。因此,从不同生物中制备抗氧化活性肽是近几年研究的热点问题。扇贝是我国重要的经济海产品,近几年扇贝养殖业发展迅速,扇贝加工生产的扇贝柱口感上佳,味道鲜美,是国际上公认的高档水产品。在扇贝柱的生产加工过程中,会产生大量的扇贝裙边下脚料,其内含有丰富的营养成分和多种生物活性物质,例如牛磺酸、蛋白质、DHA等等。人们已经从扇贝裙边中提取了抗氧化活性肽,但是在制取的过程中,其中的牛磺酸被浪费掉。牛磺酸由于具有独特的生理和药理功能,广泛应用于食品和药品两方面。天然牛磺酸与化学合成的牛磺酸相比,具有无毒性,副作用小,工艺操作相对简单,投资少等特点。人们致力于从海洋生物中获取牛磺酸的工艺研究。研究表明,扇贝裙边可以作为提取牛磺酸的材料,但在制取牛磺酸的过程中,大量的蛋白质随废水流出。如果能够采用合理的途径从扇贝裙边中同时提取出抗氧化活性肽和牛磺酸,不仅可以避免资源浪费和环境污染,而且可以最大化地提高经济效益。因此,本文以扇贝裙边为原料,对抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺进行研究。主要通过优化扇贝裙边蛋白质的提取工艺；正交实验确定碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶水解扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件；对得到的酶解多肽进行分离纯化；研究各多肽组分和混合肽的抗氧化活性；在提取扇贝裙边蛋白质的同时,对蛋白质盐析后离心的上清液进行牛磺酸的提取工艺研究。具体研究内容和结果如下：扇贝裙边蛋白质的最佳提取工艺为：扇贝裙边预处理,以料液比1：5(m/v),4℃条件下浸提4h,离心得上清；50%-60%饱和度的硫酸铵盐析,离心得蛋白质沉淀,缓冲液溶解蛋白质沉淀；透析除盐；以0.02moI/L pH6.5醋酸铵作为洗脱液,洗脱速度0.5mL/min,上样量10mL,进行Sephadex G-75凝胶过滤层析；收集合并洗脱峰,冷冻干燥,于-20℃冰箱保存。采用四因素三水平的正交实验对碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶的酶解条件进行优化。最终确定出碱性蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件：加酶量为6000U/g,反应pH11,温度45℃,反应时间4h；中性蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件：加酶量为8000U/g,反应pH7.0,温度45℃,反应时间3h；酸性蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的最佳酶解条件：加酶量为4000U/g,反应pH4.0,温度45℃,反应时间4h。对三种酶解产物的多肽和经SephadexG-25凝胶过滤层析得到的洗脱峰组分进行抗氧化活性测定,结果表明中性蛋白酶的酶解产物对羟自由基的清除率最高为64.16%,其IC5o值为134mg/mL,对羟自由基具有很强能力；酸性蛋白酶的酶解产物对DPPH自由基的清除率最高,但最大清除率仅为34.76%,对DPPH自由基的清除能力一般。扇贝裙边中牛磺酸的提取工艺为：对蛋白质盐析后离心的上清液进行色素吸附；以蒸馏水为洗脱液,流速1.5mL/min,加样量2mL,进行H+型阳离子树脂交换层析,得到纯品牛磺酸,测定牛磺酸的回收率为70.26%,虽然低于其他海洋生物提取牛磺酸的回收率,但是从扇贝裙边中成功获取两种提取物。
【关键词】：扇贝裙边 抗氧化活性肽 牛磺酸 提取工艺
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TQ914.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-26
• 1. 扇贝裙边14-17
• 1.1 扇贝裙边简介14
• 1.2 扇贝裙边的营养价值14-16
• 1.3 扇贝裙边的利用现状16-17
• 2. 牛磺酸17-21
• 2.1 牛磺酸简介17-18
• 2.2 牛磺酸的生理功能和应用18-20
• 2.2.1 保肝利胆18
• 2.2.2 抗氧化作用18
• 2.2.3 维持细胞膜正常功能18-19
• 2.2.4 促进大脑发育19
• 2.2.5 对心脏的调节作用19
• 2.2.6 调节物质代谢19-20
• 2.2.7 牛磺酸的应用20
• 2.3 牛磺酸的研究现状20-21
• 3. 抗氧化活性肽21-24
• 3.1 自由基与抗氧化活性肽21-23
• 3.2 抗氧化肽的提取工艺研究23-24
• 3.2.1 合成法23
• 3.2.2 发酵法23-24
• 3.2.3 水解法24
• 4. 立题背景及研究意义24-26
• 第二章 扇贝裙边中蛋白质的提取工艺26-36
• 1. 实验材料及药品仪器26-28
• 1.1 实验材料26
• 1.2 实验药品及溶液配制26-28
• 1.2.1 实验药品26-27
• 1.2.2 溶液配制27-28
• 1.3 实验仪器28
• 2. 实验方法28-31
• 2.1 扇贝裙边蛋白质硫酸铵盐析最佳饱和度确定28-30
• 2.1.1 扇贝裙边预处理28
• 2.1.2 扇贝裙边浸提28-29
• 2.1.3 扇贝裙边蛋白质盐析29
• 2.1.4 蛋白质浓度的测定29
• 2.1.5 最佳硫酸铵饱和度的确定29-30
• 2.2 葡聚糖凝胶层析条件的确定30-31
• 2.2.1 Sephadex G-75凝胶层析30-31
• 3. 实验结果与分析31-35
• 3.1 扇贝裙边盐析的最佳硫酸铵饱和度31-32
• 3.2 扇贝裙边蛋白质葡聚糖凝胶过滤层析最佳工艺确定32-34
• 3.3 最佳工艺条件下蛋白质的回收率34-35
• 4. 本章讨论35-36
• 第三章 扇贝裙边蛋白质的酶解工艺研究36-50
• 1. 实验材料与药品仪器36-37
• 1.1 实验材料36
• 1.2 实验药品及溶液配制36-37
• 1.2.1 实验药品36-37
• 1.2.2 溶液配制37
• 1.3 实验仪器37
• 2. 实验方法37-41
• 2.1 三种蛋白酶对扇贝裙边蛋白质水解度测定37-38
• 2.2 单酶酶解工艺优化38-39
• 2.2.1 碱性蛋白酶酶解工艺优化研究38-39
• 2.2.2 酸性蛋白酶酶解工艺优化研究39
• 2.2.3 中性蛋白酶酶解工艺优化研究39
• 2.3 单酶酶解产物抗氧化活性测定39-40
• 2.4 双酶酶解工艺40
• 2.5 复合酶酶解工艺40-41
• 3. 结果与分析41-48
• 3.1 不同蛋白酶对扇贝裙边蛋白质的水解度41-42
• 3.2 单酶酶解工艺优化42-45
• 3.2.1 碱性蛋白酶单酶水解扇贝裙边蛋白质工艺优化42-43
• 3.2.2 中性蛋白酶单酶水解扇贝裙边蛋白质工艺优化43-44
• 3.2.3 酸性蛋白酶单酶水解扇贝裙边蛋白质工艺优化44-45
• 3.3 扇贝裙边单酶酶解产物的抗氧化活性45-46
• 3.4 扇贝裙边蛋白质的双酶酶解产物的抗氧化活性46-48
• 3.5 扇贝裙边蛋白质的混合酶酶解产物的抗氧化活性48
• 4. 本章讨论48-50
• 第四章 扇贝裙边活性肽的分离纯化及抗氧化活性测定50-60
• 1. 实验材料与药品仪器50-51
• 1.1 实验材料50
• 1.2 实验药品50-51
• 1.3 实验仪器51
• 2. 实验方法51-52
• 2.1 酶解产物预处理51
• 2.2 Sephadex G-25凝胶过滤层析51
• 2.2.1 凝胶的处理51
• 2.2.2 装柱51
• 2.2.3 加样51
• 2.2.4 洗脱51
• 2.3 抗氧化活性测定51-52
• 2.3.1 羟基自由基清除率测定51-52
• 2.3.2 DPPH自由基清除率测定52
• 3. 结果与分析52-58
• 3.1 碱性蛋白酶酶解活性肽凝胶过滤层析及抗氧化活性测定52-54
• 3.1.1 Sephadex G-25凝胶过滤层析52-53
• 3.1.2 碱性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性53-54
• 3.2 中性蛋白酶酶解活性肽凝胶过滤层析及抗氧化活性测定54-56
• 3.2.1 Sephadex G-25凝胶过滤层析54
• 3.2.2 中性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性54-56
• 3.3 酸性蛋白酶酶解活性肽凝胶过滤层析及抗氧化活性测定56-58
• 3.3.1 Sephadex G-25凝胶过滤层析56
• 3.3.2 酸性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性56-58
• 4. 本章讨论58-60
• 第五章 扇贝裙边中牛磺酸的制备工艺60-65
• 1. 实验材料与实验药品仪器60-61
• 1.1 实验材料60
• 1.2 实验药品60-61
• 1.2.1 实验药品60
• 1.2.2 溶液配制60-61
• 1.3 实验仪器61
• 2. 实验方法61-62
• 2.1 蛋白质盐析上清液预处理61
• 2.2 H型阳离子交换柱层析工艺61
• 2.2.1 树脂的处理61
• 2.2.2 牛磺酸的纯化61
• 2.3 牛磺酸标准曲线的测定61-62
• 2.4 牛磺酸含量的测定62
• 3. 结果与分析62-63
• 3.1 牛磺酸标准曲线62
• 3.2 牛磺酸离子交换层析62-63
• 4. 本章讨论63-65
• 总结65-67
• 参考文献67-70
• 致谢70-71
• 个人简历71
• 发表的学术论文71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王晓茹;王颉;张亮;;扇贝裙边酱发酵工艺及营养成分分析的研究[J];食品工业科技;2011年12期

2 王建军，吕文良，肖丰健;利用扇贝裙边提取风味料的研究[J];中国调味品;1995年02期

3 王慧青;刘红英;齐凤生;;扇贝裙边香肠工艺配方研究[J];食品科技;2013年12期

4 邢荣娥;李克成;冯金华;关小红;李鹏程;;栉孔扇贝内脏、裙边油中脂肪酸组成分析[J];中国油脂;2011年11期

5 袁捷;;裙边防护工艺浅析[J];现代涂料与涂装;2012年06期

6 桑亚新;王向红;王苏;李彩;张雪娇;曾昭爽;;扇贝裙边酶解工艺优化及其氨基酸分析研究[J];中国食品学报;2012年08期

7 魏玉西,田学琳;扇贝裙边酶水解工艺条件的研究[J];海洋科学;1993年04期

8 汪之顼，万秀霞，邢茜宜，丛琳，李珏声;扇贝及其裙边中固醇物含量和分布的测定[J];康复与疗养杂志;1995年03期

9 方燕;袁信华;过世东;王利平;吴胜芳;;温室鳖与池塘鳖肌肉和裙边挥发性风味成分的研究[J];食品科学;2008年02期

10 许钟,杨宪时,张培家;珍味贝丝的研制报告[J];海洋渔业;1997年04期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 于宏伟;亢春雨;裴家伟;桑亚新;;扇贝裙边酶法水解研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年

2 陈启亮;高岩;王朋波;;抱具支撑位置裙边强度分析在车身开发中的应用[A];北京力学会第20届学术年会论文集[C];2014年

3 王小利;董秀萍;杨静峰;朱蓓薇;;扇贝裙边酶解物对扇贝糜冻藏的保护作用[A];中国食品科学技术学会第七届年会论文摘要集[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 木合塔尔;甲鱼裙边禁止带入境[N];中国国门时报;2007年

2 柄闻;八法巧识野生鳖[N];东方城乡报;2006年

3 阿娜;冬令进补有甲鱼[N];中国医药报;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 田友昊;扇贝裙边中抗氧化活性肽和牛磺酸的综合提取工艺研究[D];中国海洋大学;2015年

2 王晓茹;扇贝裙边酱的多菌种阶梯发酵工艺及风味变化研究[D];河北农业大学;2012年

3 李彩;酶解海湾扇贝裙边制备抗氧化肽的研究[D];河北农业大学;2013年

4 王苏;蛋白酶水解扇贝裙边制备鲜味剂的研究[D];河北农业大学;2014年

5 崔金会;虾夷扇贝裙边水解蛋白的制备工艺与生物活性研究[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2012年

6 丁琦;扇贝裙边发酵调味品开发研究[D];大连工业大学;2008年

7 蒋晓妍;不同养殖模式下相同规格中华鳖裙边特性研究[D];江南大学;2014年

8 杨富敏;酶解海湾扇贝裙边制备抗菌肽的研究[D];河北农业大学;2013年

9 王慧青;扇贝即食产品加工关键技术的研究与中试[D];河北农业大学;2014年

10 张旭;扇贝裙边海鲜酱油的研究[D];大连工业大学;2009年

，

本文编号：686742