OGT1对稳定NSL3蛋白并调控组蛋白H4乙酰基化修饰作用的研究

发布时间：2017-12-17 13:19

  本文关键词：OGT1对稳定NSL3蛋白并调控组蛋白H4乙酰基化修饰作用的研究

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【摘要】：含有hMOF(human MOF)的组蛋白乙酰基转移酶(HAT)NSL(非特异性致死)复合物可以特异性的乙酰基化组蛋白H4(N端)的第5,8和16位赖氨酸位点(H4K5,H4K8和H4K16)。我们之前从人细胞中纯化和鉴定了含有9个亚基的NSL复合物,其中包括O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(O-Glc NAc)转移酶(同种型1)(OGT1)。OGT是细胞中唯一能够将O-GlcNAc基团催化添加至底物蛋白的丝氨酸/苏氨酸残基的O-Glc NAc转移酶,参与调控多种细胞进程。然而,OGT1作为NSL复合物的亚基组份与其他NSL复合物亚基间的相互作用关系以及其O-GlcNAc转移酶活性是否对NSL复合物的HAT酶活性有调控作用却一无所知。在本论文中,我们利用生物化学和分子生物的学实验手段,证实了OGT1介导的O-GlcNAc修饰可以稳定NSL复合物的特异亚基NSL3,进而调控NSL复合物对组蛋白H4 N末端K5,K8和K16位点的乙酰基化催化活性。首先,我们通过siRNA干扰或过表达实验证明了OGT1对全细胞H4K16,H4K5和H4K8的乙酰化水平的影响。其次,利用共转染/免疫共沉淀实验结合体外O-GlcNAc转移酶活性检测实验发现了OGT1不仅能够特异性结合NSL3,还可以通过O-GlcNAc修饰NSL3来维持其蛋白水平的稳定。麦胚凝集素(WGA)是一种能够特异性结合O-GlcNAc残基的树脂,常用于检测内源蛋白的O-GlcNAc修饰。我们用麦胚凝集素亲和纯化实验进一步证明了NSL3在细胞中确实可以被O-GlcNAc修饰。最后,我们通过比较不再具有O-GlcNAc转移酶活性的OGT1突变体OGT1C964A与野生型OGT1对NSL3的影响,证实了野生型OGT1介导的O-GlcNAc修饰通过稳定NSL3来调控NSL复合物对细胞组蛋白H4K5,K8和K16的乙酰基化催化活性。本论文的研究结果不仅揭示了OGT1对NSL复合物的调控机制,同时为深入研究NSL复合物在细胞中的生物学功能提供了理论和实验基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q75

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本文编号：1300243