高等真菌鸟巢烷二萜和杂萜的神经突起生长作用研究

发布时间：2018-04-30 01:02

本文选题：鸟巢烷二萜 + 杂萜　；参考：《西北农林科技大学》2016年博士论文

【摘要】：神经生长因子(NGF)是第一个被发现且目前研究得最为透彻的神经营养因子。NGF具有维持神经元存活,促进神经元生长、发育、分化和成熟,诱导神经突起定向长出,促进神经突起生长的生理活性。NGF对因神经元退化、受损引起的神经系统疾病具有潜在的治疗效果。但是NGF作为一种大分子蛋白质,具有不稳定、半衰期短、药代动力学差、不易跨过血脑屏障的缺点,无法大规模应用于神经系统疾病的治疗。因此,研究者开始寻找有NGF类似活性,或能与NGF共同作用表现出神经营养活性的小分子化合物。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12细胞)是一个可以模拟神经元分化的细胞模型。NGF在PC-12细胞的膜上有Trk A和p75NTR两种类型的受体。NGF与Trk A受体结合,激活了细胞内的多条信号通路,活化细胞内的信号分子,进一步调节化合物对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。1.本文首次研究了鸟巢烷二萜sarcodonin G的19位羟基酰化修饰后的16个新的sarcodonin G苯甲酰衍生物G-1-16和化合物striatoids A-F(1-6)对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。不加入NGF时,化合物G-1-16和striatoids A-F(1-6)均未表现出促进PC-12细胞的神经突起生长活性。在16个sarcodonin G苯甲酰衍生物中,加入NGF时,化合物G-5促进NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用最强,化合物G-15抑制NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用最强;氟取代的苯甲酰衍生物对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长影响更为显著。在NGF存在时,striatoids A-F(1-6)对NGF诱导的PC12细胞表现出不同程度的促进神经突起生长活性。化合物的结构和浓度会影响其对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。加入NGF时,在1-10μM的浓度范围内,化合物G-1-16对PC-12细胞未表现出显著的细胞毒活性;在10-40μM的浓度范围内,随着浓度升高,化合物striatoids A-F(1-6)对PC-12细胞表现出细胞毒活性。2.通过Western Blot、特异性抑制剂处理和Ca2+浓度检测的方法,研究了化合物G-5和G-15对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长的初步作用机制。G-5和G-15调节了Trk A的磷酸化水平;预孵育Trk A抑制剂K252a显著地抑制了G-5和G-15对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。Ca2+信号分子参与了G-5和G-15对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。在NGF诱导的PC-12细胞中,G-5和G-15调节了PKC-βⅡ和ERK1/2的磷酸化水平;加入GF109203X和Enzastaurin(PKC抑制剂),PD98059和U0126(MAPK/ERK抑制剂)明显减弱了G-5和G-15对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。G-5和G-15调节了CREB的磷酸化水平,这一过程能够被GF109203X抑制。综合以上结果发现:Trk A受体,Ca2+信号分子,PKC信号分子和ERK信号分子参与了G-5和G-15对NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长作用。同时CREB的活化也在这一生物学过程中发挥了重要的作用。3.从猴头菇(Hericium erinaceus)的子实体中分离得到1个新化合物hericenone K(H-11)和10个已知化合物,分别为ergosterol peroxide(H-1),cerevisterol(H-2),3b,5a,9a-trihydroxy-ergosta-7,22-dien-6-one(H-3),inoterpene A(H-4),astradoric acid C(H-5),betulin(H-6),oleanolic acid(H-7),ursolic acid(H-8),hemisceramide(H-9),3,4-dihydro-5-methoxy-2-methyl-2-(4’-methyl-2’-oxo-3’-pentenyl)-9(7H)-oxo-2H-furo[3,4-h]benzopyran(H-10)。化合物H-3~6,H-8和H-9是首次从猴头菇中分离得到的。化合物H-10和H-11分别有一个手性碳,通过手性HPLC将H-10和H-11分别拆分成对映异构体,并运用CD谱鉴定了(-)-10和(+)-10的绝对构型。不加NGF,化合物H-1~H-10不能促进PC-12细胞的神经突起生长。加入NGF(20ng/ml),化合物H-1、H-2、H-3、H-10、(-)-10和(+)-10对NGF诱导的PC-12细胞表现出不同程度的促进神经突起生长活性。从猴头菇菌丝体的甲醇提取物中分离得到1个新化合物5-acetyl-1,6-dihydro-3-pyridinecarboxylic acid(H-17),1个新天然产物3-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde(H-13),6个已知化合物4-chloro-3,5-dimethoxybenzoic methyl ester(H-12)、erinacine A(H-14)、herierinⅢ(H-15)、herierinⅣ(H-16)、erinacerin G(H-18)、uridine(H-19)。加入NGF(2ng/ml),猴头菇菌丝体的甲醇提取物、化合物H-12和H-14能够显著地促进NGF诱导的PC-12细胞的神经突起生长。化合物H-12和H-14对NGF去除诱导的已分化PC12细胞损伤具有保护作用。化合物H-12和H-14提高了NGF诱导的PC-12细胞的Trk A磷酸化水平。化合物H-14能够促进大鼠皮质神经元的神经突起生长。
[Abstract]:Nerve growth factor ( NGF ) is one of the most penetrating neurotrophic factors in PC - 12 cells . NGF has a potential therapeutic effect on NGF - induced nerve growth in PC - 12 cells . The effects of G - 5 and G - 15 on the growth of NGF - induced PC - 12 cells were studied .

【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q42

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