SOSS1复合体组装及ssDNA识别的结构基础研究

发布时间：2016-11-25 19:50

  本文关键词：SOSS1复合体组装及ssDNA识别的结构基础研究，由笔耕文化传播整理发布。

《浙江大学》 2015年

SOSS1复合体组装及ssDNA识别的结构基础研究

任文丹  

【摘要】：DNA双链断裂(DNA double-strand breaks, DSBs)可导致基因组重排和细胞死亡,是最具有细胞毒性的DNA损伤形式之一。有缺陷的DSB修复是造成机体癌变、神经退行性疾病、免疫缺陷、心血管疾病以及一些代谢性综合症的主要原因之一。同源重组(homologous recombination, HR)是细胞内一种高效的DSB修复方式,它起始于在DNA损伤处切割形成3’单链DNA (ssDNA)。ssDNA结合蛋白结合并保护暴露的ssDNA,同时参与DSB修复的信号传导。因此,对ssDNA结合蛋白进行结构和功能的研究将为阐释DSB修复的分子机理奠定坚实基础。最新研究发现单链DNA结合蛋白SOSSB1(hSSB1)和SOSSB2(hSSB2),可通过与SOSSA和SOSSC分别形成SOSS1和SOSS2复合体,参与DSB修复,并激活细胞周期检验点。然而,目前为止,对SOSS复合物中各组分的组装及其识别ssDNA的分子机制仍不清楚。因此,本课题主要利用大肠杆菌表达系统,首先,在体外重构了包含SOSSA N端结构域(SOSSAN)、全长SOSSB1及SOSSC的复合物SOSSAN/B1/C以及复合物SOSSAN/B1/dT12和复合物SOSSAN/B1/C/dT35,并筛选获得相应的高分辨率蛋白晶体。然后,通过进一步的数据分析、结构解析以及一系列生化与细胞实验证明了：SOSSAN作为一个支架蛋白介导了SOSS1复合体的组装,并参与了SOSSB1和SOSSC在细胞中稳定性的维持和核定位过程；而SOSSB1则是ssDNA识别的主要介导者,它可以通过不同的蛋白表面参与SOSSAN及ssDNA的结合,同时,SOSSAN与SOSSC却对ssDNA结合几乎没有影响。本论文研究结果不仅揭示了SOSS1复合体组装和识别短的单链DNA的分子机制,同时也为进一步研究SOSS1复合物对长链ssDNA识别以及由它介导并参与的DSB修复通路的具体机理奠定了坚实基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q523
【目录】：

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本文编号：192734