B型流感病毒诱发天然免疫应答及M1核质穿梭对于病毒复制的调控研究

发布时间：2018-10-29 08:53

【摘要】：与A型流感病毒常引起世界大流行相比,B型流感病毒一般引起局部流行,严重情况下可致人死亡。作为一种重要的流行病病因,B型流感病毒的复制机理及免疫学特征仍有待于研究。病毒感染机体后,首先触发机体的天然免疫应答。细胞感染实验发现,在B型流感病毒感染早期,Ⅰ型和Ⅲ型干扰素、干扰素诱导基因以及前炎症因子等细胞因子快速并且高水平表达。RIG-Ⅰ是细胞内重要的RNA病毒核酸受体,利用CRISPR/Cas9技术敲除细胞内RIG-Ⅰ基因以后,我们发现B型流感病毒感染后RIG-Ⅰ下游转录因子NF-κB、IRF3和STAT1的磷酸化水平及细胞因子表达量急剧下调,显示B型流感病毒诱导的细胞因子产生是RIG-Ⅰ通路依赖型。进一步实验发现,B型流感病毒在感染早期促进RIG-Ⅰ及其E3泛素连接酶TRIM25的线粒体定位,并且强烈诱导RIG-Ⅰ Lys63 (K63)连接的聚泛素化修饰。同时,TRIM25与B型流感病毒NS1蛋白(NS1-B)N端RNA结合结构域(RBD)结合,与RIG-Ⅰ形成RIG-I/TRIM25/NS1-B复合物,阻止了NS1-B C端效应结构域(TED)对RIG-Ⅰ泛素化的抑制,从而保证RIG-Ⅰ能迅速发生泛素化修饰。综上所述,在B型流感病毒感染早期,RIG-Ⅰ迅速发生调节性泛素化修饰,并定位于线粒体向下游传导信号,引起下游转录因子的活化,细胞因子大量产生。其中,TRM25发挥对信号通路的正向调节作用。B型流感病毒是由8条单负链RNA组成的囊膜病毒。其基因组共编码13种蛋白,其中基质蛋白M1(BM1)除了作为病毒结构蛋白外,是否参与对病毒复制的调控尚不清楚。通过对BM1在B型流感病毒感染早期和晚期存在核质穿梭现象的观察,我们鉴定出BM1序列上存在两个CRM1依赖的出核信号肽(NES)(3-14位氨基酸和124-133位氨基酸)和1个入核信号肽(NLS)(76-94位氨基酸),并找出了关键性的氨基酸位点。同时利用质谱分析发现了BM1蛋白NLS存在2个位点的磷酸化修饰,即Thr80 (T80)和Ser84 (S84)。进一步研究发现,T80和S84的磷酸化修饰促进EGFP-NLS的入核,并促进BM1与细胞核运输蛋白importinα1的结合。反向遗传实验表明,突变BM1 NES、NLS关键氨基酸位点和磷酸化位点后,病毒无法进行包装,说明这些位点在B型流感病毒复制过程中发挥着关键的作用。
[Abstract]:Compared with influenza A viruses, influenza B viruses usually cause local epidemics and death in severe cases. As an important epidemiological cause, the replication mechanism and immunological characteristics of influenza B virus remain to be studied. After the virus infects the body, first triggers the body's innate immune response. In the early stage of influenza B virus infection, cytokines such as interferon type I and type 鈪，

本文编号：2297221