EHBP-1功能域作用机制的研究
发布时间：2019-08-30 09:56
【摘要】：真核细胞的内吞途径对大分子、液体、膜和膜蛋白的内吞和运输非常重要。内吞途径中最缺乏了解的一个通路是内吞循环路径。内吞循环是将内吞的大分子(通常是受体)和胞外液体从内涵体送回到质膜。在以前的研究发现,小GTP蛋白RAB-10是调节内吞循环的关键蛋白。RAB-10作用于RME-1的上游,调节肠细胞中的基底循环和中间神经元中的突触后蛋白循环运输。EHBP-1/Ehbpl(Eps-15-homology domain Binding Protein-1)是RAB-10/Rab10的效应因子,是一个保守的内吞循环调控蛋白。ehbp-1突变有着和rab-1O突变一样的内涵体形态和货物蛋白定位缺陷。EHBP-1含有三个结构域：N端的类C2结构域,中间的细胞骨架结合CH域(Calponin Homology Domain)和C端的螺旋-螺旋域。现有研究证明EHBP-1是通过其C端的螺旋-螺旋域介导了与RAB-IO(GTP)的结合,但EHBP-1具体的分子调控机理尚不清楚,需开展结构功能研究来解析其功能机制。在本研究中,我们发现EHBP-1通过N端的类C2结构域与富含phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2)的膜结构结合,并通过氨基酸定点突变确定了NT-C2中介导膜结合的关键氨基酸残基。另外,EHBP-1中间的CH结构域能够与微丝结构结合,值得注意的是,这种结合能够被RAB-10(GTP)促进。在线虫肠上皮细胞中,RAB-10/EHBP-1系统的任一成员缺失都会导致基底循环货物蛋白滞留在内涵体,并且这些内涵体无法形成正常的管网状结构。因此,我们提出这样一个假设：EHBP-1将内涵体膜结构与微丝骨架连接起来以促进内涵体形成管状结构,RAB-10(GTP)促进了这一过程。我们的结果显示,局部微丝网络能够稳定参与循环货物分类和运输的管状内涵体结构域。
【图文】：
华中科技大学博壬学位论文逡逑发现杂交后的线虫肠细胞里的大泡累积表型没有缓解，，缺失ＮＴ－Ｃ２域的ＥＨＢＰ－１不能逡逑挽救ｅＡ咕－／抑２５巧》表型（图１Ｄ－Ｄ，）。逡逑Ａ邋４４０逦７扣邋邋邋８邋巧逡逑ａ－Ｕ＾ｋｃ逦Ｈ邋Ｉ邋９０１逡逑逦邋Ｄｉｅ邋逦逡逑￣Ｉ＾Ｈｉ逡逑氃田逡逑９ｈｂｐ．１（ｔｍ２Ｓ２３），邋■？ａａｉ逡逑ＥＨＢＰ－１，ＡＣ２，＾ＦＰ逡逑图１巧失Ｎ端类Ｕ结构巧或中间ＣＨ结构域的ＥＨＢＰ－ｌ不能l捑认叱嫠鹣赴械拇箦义吓荼硇汀＃ǎ粒牛龋拢校煨蛄星蚴疽馔迹味死啵茫步峁褂颍ǎ危裕茫玻诓康腻义希茫龋ǎ茫幔欤穑铮睿椋铄澹龋铮恚铮欤铮纾┙峁褂蚝停枚说穆菪菪峁褂颍ǎ茫茫５鞍字式峁褂蛴缅义希保峰义
本文编号：2530669
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