基于模拟微重力响应下毕赤酵母外源蛋白质高效表达系统的调控

发布时间：2020-12-29 03:17

　　目前许多研究发现多种微生物在模拟微重力环境下的生理代谢和基因表达都发生了很大的变化。毕赤酵母因其对外源蛋白质经济高效的表达,是目前最引起关注的真核表达系统之一。本论文研究组成型重组毕赤酵母在模拟微重力(SMG)环境下单批次培养及长期继代培养过程中外源蛋白质表达特点;通过差异蛋白质组学研究诱导型重组毕赤酵母在SMG环境下促进外源蛋白质表达的关键代谢通路;对蛋白质组学和前期获得的转录组学数据挖掘,通过共表达方法筛选可促进外源蛋白质表达的功能基因;研究不同类型功能基因共表达方式与底盘酵母细胞适配性。主要结果有:(1)组成型毕赤酵母在SMG环境单批次培养及长期继代培养过程中:反应器较高转速所创造的SMG环境有利于酵母细胞增殖,促进外源蛋白质表达;SMG环境发酵液维持低pH,有利于外源蛋白质积累;SMG环境对细胞产生氧化胁迫,参与氧化胁迫应答的基因过表达,辅助蛋白质正确折叠。(2)差异蛋白质组学分析SMG环境下诱导型毕赤酵母外源蛋白质表达过程中代谢机制,发现甲醇代谢和糖类代谢、氧化胁迫应答、翻译和折叠及其他代谢途径的蛋白质过表达可以复制蛋白质正确折叠。其中参与氧化胁迫应答的相关蛋白起重要作用。(... 

【文章来源】：北京理工大学北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

AOX1启动子部分顺式作用元件

北京理工大学博士学位论文P1p 调控生物素代谢[26]。设计转录因子及其作用元件个基因，提高外源蛋白质产量。过表达转录因子 HAC1p毕赤酵母中的表达[36]。过表达调控基因翻译的转录因子达[37]。转录因子 AFT1p 激活铁转运途径基因，过表达产量[38]。

图 1-3 旋转细胞培养系统（RCCS）示意图[102]ll culture system. A, HARV system used to generate SMG cond HARV vessel. C, Orientation of HARV system to generate SM

【参考文献】：
博士论文
[1]糖基化对β-D-葡萄糖醛酸苷酶催化特性及构象的影响[D]. 邹树平.天津大学 2010

硕士论文
[1]β-D-葡萄糖醛酸苷酶催化多样性及定向合成GAMG的酶基因克隆与表达[D]. 王小艳.石河子大学 2007



本文编号：2944901