长链非编码RNA GUARDIN调控细胞衰老的机制研究
发布时间：2021-01-18 05:17
细胞衰老是一种不可逆的细胞休眠状态,由多种机制驱动,如端粒缩短导致的复制衰竭、癌基因激活、基因毒性、营养和氧化应激等。这些机制通常在DNA损伤反应（DDR）累积的基础上,导致肿瘤抑制因子p53的激活,继而调控p21和p16等细胞周期依赖性激酶（CDK）抑制因子的表达。虽然细胞衰老最初被认为是一种与正常细胞老化相呼应的被动的细胞自主抗增殖程序,但人们越来越认识到细胞衰老在许多其他生理和病理过程中起着重要作用,包括肿瘤抑制、神经退行性病变和组织重塑。此外,由衰老细胞分泌蛋白改变导致的衰老相关分泌表型（SASP）还参与调节炎症、组织微环境和年龄相关疾病。越来越多的非编码RNA被发现参与调节细胞衰老。例如,长链非编码RNA MIR31HG通过调节p16的表达来调节致癌基因诱导的细胞衰老,而HOTAIR通过DDR-p53-p21信号激活细胞衰老。此外,lncRNAOVAAL通过调节CDK抑制因子p27的表达来阻止细胞衰老。本实验室在之前发现lncRNAGUARDIN在维持基因组稳定性中起着重要作用。而且沉默GUARDIN可诱导某些肿瘤细胞发生,但其具体作用机制尚不清楚。Rapamycin（雷帕霉...
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
第1章 绪论
1.1 细胞衰老的概述
1.1.1 细胞衰老的发现
1.1.2 诱发细胞衰老的因素
1.1.3 细胞衰老的两面性
1.1.4 FOXO调控细胞衰老
1.1.5 Rapamycin调控细胞衰老
1.2 长链非编码RNA的概述
1.2.1 长链非编码RNA的分类
1.2.2 长链非编码RNA的作用机制
1.2.3 长链非编码RNA调控细胞衰老
1.2.4 长链非编码RNA GUARDIN
第2章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 药品和试剂盒
2.1.3 抗体
2.1.4 表达载体和质粒
2.1.5 引物、分子探针和shRNA
2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 PCR（聚合酶链式反应）
2.3.2 纯化回收DNA
2.3.3 限制性核酸内切酶酶切
2.3.4 感受态细胞制备
2.3.5 目的片段与载体的连接
2.3.6 连接产物和质粒的转化及验证保种
2.3.7 抽提质粒
2.3.8 细胞复苏、培养、传代及保种
2.3.9 质粒转染
2.3.10 慢病毒包装、感染细胞及细胞筛选
2.3.11 细胞总RNA提取
2.3.12 RNA逆转录
2.3.13 实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qPCR）
2.3.14 蛋白质样品制备和定量
2.3.15 蛋白质免疫印迹技术（Western blotting）
2.3.16 考马斯亮蓝染色
2.3.17 RNA体外转录
2.3.18 RNA免疫印迹技术（Northern blotting）
2.3.19 RNA荧光原位杂交（FISH）
2.3.20 RNA pulldown
2.3.21 IP（免疫共沉淀技术）
2.3.22 RIP（RNA免疫共沉淀技术）
2.3.23 CHIP（染色质免疫共沉淀）
2.3.24 双荧光素酶报告基因实验
2.3.25 细胞基因组提取
2.3.26 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色
2.3.27 酶联免疫吸附技术（Elisa）
2.3.28 免疫荧光（IF）
2.3.29 细胞核质分离
2.3.30 RNA测序
2.3.31 哺乳动物双杂交系统
2.3.32 数据处理和分析
第3章 实验结果与分析
3.1 GUARDIN抑制细胞衰老
3.2 GUARDIN通过转录抑制p21调控细胞衰老
3.3 GUARDIN促进LRP130/PGC1α相互作用
3.4 LRP130/PGC1α间接转录调控p21
3.5 GUARDIN通过FOXO4调控p21
3.6 LRP130/PGC1α直接转录调控FOXO4
3.7 GUARDIN-FOXO4信号轴独立于BARD1、BRCA1和miR-23a
3.8 Rapamycin通过转录因子FOSL2调控GUARDIN
第4章 实验讨论
4.1 讨论与总结
4.2 创新点
4.3 研究不足与展望
参考文献
附录1 响应rapamycin的转录因子信息
附录2 人体组织中GUARDIN、LRP130和FOXO4相关性
致谢
在读期间发表的学生论文与取得的其他研究成果
本文编号：2984349
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
第1章 绪论
1.1 细胞衰老的概述
1.1.1 细胞衰老的发现
1.1.2 诱发细胞衰老的因素
1.1.3 细胞衰老的两面性
1.1.4 FOXO调控细胞衰老
1.1.5 Rapamycin调控细胞衰老
1.2 长链非编码RNA的概述
1.2.1 长链非编码RNA的分类
1.2.2 长链非编码RNA的作用机制
1.2.3 长链非编码RNA调控细胞衰老
1.2.4 长链非编码RNA GUARDIN
第2章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 药品和试剂盒
2.1.3 抗体
2.1.4 表达载体和质粒
2.1.5 引物、分子探针和shRNA
2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 PCR（聚合酶链式反应）
2.3.2 纯化回收DNA
2.3.3 限制性核酸内切酶酶切
2.3.4 感受态细胞制备
2.3.5 目的片段与载体的连接
2.3.6 连接产物和质粒的转化及验证保种
2.3.7 抽提质粒
2.3.8 细胞复苏、培养、传代及保种
2.3.9 质粒转染
2.3.10 慢病毒包装、感染细胞及细胞筛选
2.3.11 细胞总RNA提取
2.3.12 RNA逆转录
2.3.13 实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qPCR）
2.3.14 蛋白质样品制备和定量
2.3.15 蛋白质免疫印迹技术（Western blotting）
2.3.16 考马斯亮蓝染色
2.3.17 RNA体外转录
2.3.18 RNA免疫印迹技术（Northern blotting）
2.3.19 RNA荧光原位杂交（FISH）
2.3.20 RNA pulldown
2.3.21 IP（免疫共沉淀技术）
2.3.22 RIP（RNA免疫共沉淀技术）
2.3.23 CHIP（染色质免疫共沉淀）
2.3.24 双荧光素酶报告基因实验
2.3.25 细胞基因组提取
2.3.26 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色
2.3.27 酶联免疫吸附技术（Elisa）
2.3.28 免疫荧光（IF）
2.3.29 细胞核质分离
2.3.30 RNA测序
2.3.31 哺乳动物双杂交系统
2.3.32 数据处理和分析
第3章 实验结果与分析
3.1 GUARDIN抑制细胞衰老
3.2 GUARDIN通过转录抑制p21调控细胞衰老
3.3 GUARDIN促进LRP130/PGC1α相互作用
3.4 LRP130/PGC1α间接转录调控p21
3.5 GUARDIN通过FOXO4调控p21
3.6 LRP130/PGC1α直接转录调控FOXO4
3.7 GUARDIN-FOXO4信号轴独立于BARD1、BRCA1和miR-23a
3.8 Rapamycin通过转录因子FOSL2调控GUARDIN
第4章 实验讨论
4.1 讨论与总结
4.2 创新点
4.3 研究不足与展望
参考文献
附录1 响应rapamycin的转录因子信息
附录2 人体组织中GUARDIN、LRP130和FOXO4相关性
致谢
在读期间发表的学生论文与取得的其他研究成果
本文编号：2984349
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