多抗性蛋白（CpLEA5，AgRPS3aE）的基因克隆及生物功能研究
发布时间：2021-03-18 14:40
极端环境下生存的生物,经过长期的适应及进化,其必然具有独特的抗性物质及代谢途径。腊梅能在低于冰点的低温条件下开花,预示着腊梅花中必含有使其适于在低温下生存的物质。LEA蛋白的超量表达可能与腊梅的低温抗性有关。利用本实验室已经构建好的腊梅花c DNA文库,成功克隆出了1个LEA基因。Cp LEA5（Gene bank登录号:KT727031）。随后将这个基因在原核和真核生物转化体系中表达,测定了表达出来的蛋白的抗冻活性。本实验通过低温对大肠杆菌阳性克隆菌株和野生型菌株进行处理,研究它们的生物活性以及细胞膜通透性。通过低温胁迫,阳性克隆菌株存活率比空载菌株高约20%。通过电导率测定,阳性克隆菌株细胞膜损伤程度仅为空载菌株的55%,阳性克隆菌株细胞膜完整性遭到破坏的程度比空载菌株小,说明Cp LEA5基因能提高表达宿主菌的抗低温能力。我们还构建了植物表达载体p TEV7::Cp LEA5,利用农杆菌介导转化技术对拟南芥进行遗传转化,并进行拟南芥阳性植株的筛选,得到预期的转Cp LEA5基因拟南芥并对其进行抗冻生物功能鉴定。在极端环境生长的微生物也具有抗性蛋白,使其在极短的环境下生长繁育.以本...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 研究目的及意义
1.2 植物晚期胚胎丰富蛋白质（LEA proteins）概述
1.2.1 LEA蛋白质的分类
1.2.2 LEA蛋白质的结构
1.2.3 LEA蛋白的亚细胞定位
1.2.4 LEA蛋白编码基因的表达调控
1.2.5 LEA蛋白的功能
1.2.6 有关腊梅的研究
1.3 核糖体蛋白（Ribosome Protein）概述
1.3.1 核糖体的结构与组成
1.3.2 核糖体蛋白的核糖体外功能
1.3.3 核糖体蛋白质与肿瘤、先天性疾病的关系
1.3.4 核糖体蛋白质与植物抗逆境胁迫的关系
第2章 研究内容
2.1 腊梅晚期胚胎发生丰富蛋白CpLEA5的基因克隆及生物功能验证
2.1.1 实验材料与试剂
2.1.2 实验方法
2.2 嗜盐曲霉核糖体蛋白AgS3aE的基因克隆及生物功能验证
2.2.1 试剂与材料
2.2.2 实验方法
第3章 实验结果
3.1 CpLEA5基因的克隆
3.2 CpLEA5基因及蛋白的生物信息学分析
3.3 CpLEA5基因的原核表达及其所表达蛋白抗冻活性测定
3.3.1 CpLEA5基因原核表达载体的构建及蛋白表达
3.3.2 低温胁迫后大肠杆菌细胞存活率的测定
3.3.3 低温胁迫后大肠杆菌细胞膜通透性测定
3.4 CpLEA5基因在酵母中抗逆功能分析
3.4.1 酵母表达载体pRUL129-CpLEA5的构建
3.4.2 不同逆境胁迫下酵母转化子的抗性分析
3.5 F233CpLEA5基因在植物中抗逆功能分析
3.5.1 转CpLEA5基因拟南芥植株的DNA鉴定
3.5.2 转CpLEA5基因的拟南芥植株的RT-PCR检测
3.5.3 转CpLEA5基因的拟南芥Western blotting鉴定
3.5.4 转Cp LEA5基因拟南芥的生物功能分析
3.6 Ag RPS3aE基因的克隆及生物信息学分析
3.7 Ag RPS3aE基因在稻瘟菌遗传转化中的应用研究
3.8 Ag RPS3aE在提高植物抗盐性中的应用研究
第4章 讨论
结论
附： 萝卜硫素制剂制备方法优化
第1章 文献综述
1.1 植物次生代谢与逆境胁迫
1.2 植物次生代谢产物的药用价值
1.3 硫代葡萄糖苷向异硫氰酸酯的转化
1.4 烹饪对硫代葡萄糖苷及异硫氰酸酯造成的损失
1.5 萝卜硫素的化学预防活性
1.6 萝卜硫素的吸收和代谢
第2章 实验方法
2.1 实验试剂与仪器
2.2 试验方法
第3章 实验结果
3.1 三种不同的青菜花芽制剂中萝卜硫素（SF）和萝卜硫苷的含量
3.2 小鼠口服青菜花制剂后萝卜硫素、萝卜硫素-谷胱甘肽、萝卜硫苷的药代动力学模型
3.3 萝卜硫素和萝卜硫素-谷胱甘肽（SF-GSH）在组织中的分布
第4章 讨论
结论
参考文献
作者简介及攻读期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的克隆及表达分析[J]. 马婧,孙文婷,王晶,眭顺照,李名扬. 园艺学报. 2014(08)
[2]基因组学在作物抗逆性研究中的新进展[J]. 贾琪,吴名耀,梁康迳,孙新立,林文雄. 中国生态农业学报. 2014(04)
[3]核糖体的结构与功能研究[J]. 杨品红,王志陶,王志勇. 安徽农业科学. 2011(06)
[4]大庆黑鱼泡水源浮游植物初步调查及鱼产力估计[J]. 袁改霞,肖荣欣,王辉,梁彦涛,尤凤丽,张虹,冯伟,卞立红. 中国农学通报. 2010(07)
[5]作物分子生态学研究与展望[J]. 陈婷,林文雄,熊君,沈荔花,王经源,林瑞余,李兆伟,李振方. 中国生态农业学报. 2008(04)
[6]极端微生物研究进展[J]. 赵春杰,吕耀龙,马玉玲. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2008(01)
[7]植物抗逆机制与基因工程研究进展[J]. 高银. 内蒙古农业科技. 2007(05)
[8]Discovery and development of sulforaphane as a cancer chemopreventive phytochemical[J]. Yuesheng ZHANG~2,Li TANGDepartment of Cancer Prevention and Control,Roswell Park Cancer Institute,Buffalo,New York 14263,USA. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)
[9]植物次生代谢及其与环境的关系[J]. 阎秀峰,王洋,李一蒙. 生态学报. 2007(06)
[10]盐胁迫下植物基因的表达与基因工程研究进展[J]. 张改娜,何涛,王学仁,贾敬芬. 武汉植物学研究. 2005(02)
本文编号：3088493
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
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中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 研究目的及意义
1.2 植物晚期胚胎丰富蛋白质（LEA proteins）概述
1.2.1 LEA蛋白质的分类
1.2.2 LEA蛋白质的结构
1.2.3 LEA蛋白的亚细胞定位
1.2.4 LEA蛋白编码基因的表达调控
1.2.5 LEA蛋白的功能
1.2.6 有关腊梅的研究
1.3 核糖体蛋白（Ribosome Protein）概述
1.3.1 核糖体的结构与组成
1.3.2 核糖体蛋白的核糖体外功能
1.3.3 核糖体蛋白质与肿瘤、先天性疾病的关系
1.3.4 核糖体蛋白质与植物抗逆境胁迫的关系
第2章 研究内容
2.1 腊梅晚期胚胎发生丰富蛋白CpLEA5的基因克隆及生物功能验证
2.1.1 实验材料与试剂
2.1.2 实验方法
2.2 嗜盐曲霉核糖体蛋白AgS3aE的基因克隆及生物功能验证
2.2.1 试剂与材料
2.2.2 实验方法
第3章 实验结果
3.1 CpLEA5基因的克隆
3.2 CpLEA5基因及蛋白的生物信息学分析
3.3 CpLEA5基因的原核表达及其所表达蛋白抗冻活性测定
3.3.1 CpLEA5基因原核表达载体的构建及蛋白表达
3.3.2 低温胁迫后大肠杆菌细胞存活率的测定
3.3.3 低温胁迫后大肠杆菌细胞膜通透性测定
3.4 CpLEA5基因在酵母中抗逆功能分析
3.4.1 酵母表达载体pRUL129-CpLEA5的构建
3.4.2 不同逆境胁迫下酵母转化子的抗性分析
3.5 F233CpLEA5基因在植物中抗逆功能分析
3.5.1 转CpLEA5基因拟南芥植株的DNA鉴定
3.5.2 转CpLEA5基因的拟南芥植株的RT-PCR检测
3.5.3 转CpLEA5基因的拟南芥Western blotting鉴定
3.5.4 转Cp LEA5基因拟南芥的生物功能分析
3.6 Ag RPS3aE基因的克隆及生物信息学分析
3.7 Ag RPS3aE基因在稻瘟菌遗传转化中的应用研究
3.8 Ag RPS3aE在提高植物抗盐性中的应用研究
第4章 讨论
结论
附： 萝卜硫素制剂制备方法优化
第1章 文献综述
1.1 植物次生代谢与逆境胁迫
1.2 植物次生代谢产物的药用价值
1.3 硫代葡萄糖苷向异硫氰酸酯的转化
1.4 烹饪对硫代葡萄糖苷及异硫氰酸酯造成的损失
1.5 萝卜硫素的化学预防活性
1.6 萝卜硫素的吸收和代谢
第2章 实验方法
2.1 实验试剂与仪器
2.2 试验方法
第3章 实验结果
3.1 三种不同的青菜花芽制剂中萝卜硫素（SF）和萝卜硫苷的含量
3.2 小鼠口服青菜花制剂后萝卜硫素、萝卜硫素-谷胱甘肽、萝卜硫苷的药代动力学模型
3.3 萝卜硫素和萝卜硫素-谷胱甘肽（SF-GSH）在组织中的分布
第4章 讨论
结论
参考文献
作者简介及攻读期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的克隆及表达分析[J]. 马婧,孙文婷,王晶,眭顺照,李名扬. 园艺学报. 2014(08)
[2]基因组学在作物抗逆性研究中的新进展[J]. 贾琪,吴名耀,梁康迳,孙新立,林文雄. 中国生态农业学报. 2014(04)
[3]核糖体的结构与功能研究[J]. 杨品红,王志陶,王志勇. 安徽农业科学. 2011(06)
[4]大庆黑鱼泡水源浮游植物初步调查及鱼产力估计[J]. 袁改霞,肖荣欣,王辉,梁彦涛,尤凤丽,张虹,冯伟,卞立红. 中国农学通报. 2010(07)
[5]作物分子生态学研究与展望[J]. 陈婷,林文雄,熊君,沈荔花,王经源,林瑞余,李兆伟,李振方. 中国生态农业学报. 2008(04)
[6]极端微生物研究进展[J]. 赵春杰,吕耀龙,马玉玲. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2008(01)
[7]植物抗逆机制与基因工程研究进展[J]. 高银. 内蒙古农业科技. 2007(05)
[8]Discovery and development of sulforaphane as a cancer chemopreventive phytochemical[J]. Yuesheng ZHANG~2,Li TANGDepartment of Cancer Prevention and Control,Roswell Park Cancer Institute,Buffalo,New York 14263,USA. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)
[9]植物次生代谢及其与环境的关系[J]. 阎秀峰,王洋,李一蒙. 生态学报. 2007(06)
[10]盐胁迫下植物基因的表达与基因工程研究进展[J]. 张改娜,何涛,王学仁,贾敬芬. 武汉植物学研究. 2005(02)
本文编号：3088493
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