中药鸡骨草质量控制及对斑马鱼肝损伤保护作用的初步研究

发布时间：2017-12-07 06:03

本文关键词：中药鸡骨草质量控制及对斑马鱼肝损伤保护作用的初步研究

【摘要】：目的:鸡骨草为豆科植物广州相思子Abruscantoniensis Hance的干燥全株,主要分布于中国的广东、广西等地,并为两广的道地药材。鸡骨草全草入药具有利湿退黄,清热解毒,疏肝止痛、活血化瘀等功效,现代药理研究表明,鸡骨草具有保肝护肝、抗氧化、抗炎症反应、抑菌、抗病毒、免疫调节、降脂等药理作用,临床上常用来治疗肝病。查阅文献可知,鸡骨草中含有黄酮、三萜、生物碱、蒽醌、多糖、有机酸、挥发油等多种化学成分。其中生物碱、黄酮、三萜类是鸡骨草的主要活性成分。但目前鸡骨草质量控制研究主要集中在生物碱的含量测定,黄酮类的研究比较少,三萜类的关注度更是不高。现阶段,指纹图谱结合多成份含量测定是比较适合中药的一种质量控制模式,符合中药模糊的特征,使中药质量控制更科学、全面。在2015年版中国药典中,鸡骨草只有定性鉴别没有含量测定项,不利于鸡骨草的质量控制,因此建立一个全面、合理的质量标准十分必要,为鸡骨草质量标准的完善提供依据。方法:(1)采用UPLC法结合相似度评价、聚类分析、主成分分析,建立鸡骨草UPLC指纹图谱。(2)采用UPLC/Q-TOF-MSE技术结合UNIFI天然产物数据库及鸡骨草数据库对鸡骨草中的化学成分进行快速分析鉴定。(3)采用UPLC法同时测定鸡骨草中相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷的含量,为鸡骨草药材质量标准改进提供方法。(4)采用HPLC-DAD-CAD法结合相似度评价,建立鸡骨草HPLC-DAD-CAD指纹图谱。(5)利用硫代乙酰胺诱导的斑马鱼肝损伤模型,对鸡骨草肝损伤的保护作用进行初步研究。结果:(1)建立了鸡骨草药材的UPLC指纹图谱,确定了 52个共有峰,指认出7个共有峰,运用相似度评价、聚类分析、主成分分析对16批鸡骨草药材质量评价,三种分析方法所得结果一致,三者相互验证,增加结果的可信度。分析结果显示,16个产地的鸡骨草被分为4类,广东肇庆的样品为野生药材单独聚为一类,两批广东栽培药材归为一个类别,与广西的样品均不为一类,可见广西和广东药材质量还是有区别的;而其中一批广西钦州药材单独聚为一类,可见即便是同一产地,也有个别批次药材质量有较大差异。(2)建立四种有效成分相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷的UPLC含量测定方法,测定了 16个不同产地的鸡骨草药材中4种成分的含量。方法学考察表明该方法重复性、稳定性、精密性和加样回收试验均符合中国药典相关标准,可作为鸡骨草中相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷的含量测定方法。(3)首次建立了鸡骨草HPLC-DAD-CAD指纹图谱,初步可指认12个共有峰;实验结果可知,相同条件下,紫外指纹图谱与CAD指纹图谱差异明显,CAD图谱所检测到的峰更多、更全面,如三萜类,在紫外检测器下的基本无响应,但在CAD检测器下就有很好的响应,并在鸡骨草中含量较高,是主要成分之一,可见本实验引入电喷雾式检测器的必要性和重要性,为鸡骨草中的三萜类成分的进一步研究提供了思路和方法。(4)建立了鸡骨草化合物数据库,运用UNIFI对数据进行处理分析、自动匹配,再经过人工核对校正,共鉴别出40个化合物,推测了鸡骨草中的具有代表性黄酮碳苷及三萜皂苷可能的裂解规律。(5)验证了硫代乙酰胺诱导的斑马鱼肝损伤模型,并运用该模型对鸡骨草肝损伤的保护作用进行初步研究,结果表明,鸡骨草对硫代乙酰胺诱导的肝损伤有一定的保护作用。结论:本实验建立了鸡骨草UPLC指纹图谱、鸡骨草HPLC-DAD-CAD指纹图谱结合4种活性成分含量测定的方法,旨在为鸡骨草质量控制提供较为全面、有效的评价方法,为鸡骨草的质量控制及完善质量标准提供依据;运用UPLC/Q-TOF-MSE技术可以快速全面地对鸡骨草化学成分进行鉴别分析,为鸡骨草的药效物质基础研究提供帮助,为鸡骨草的质量控制提供物质基础与数据支撑,有利于鸡骨草进一步的研究和开发;实验研究表明鸡骨草对硫代乙酰胺诱导的肝损伤有一定的保护作用,与已有的研究成果相互验证,为其他保肝中药筛选及研究提供一个新思路。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R285.5

【参考文献】

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