沉默FBI-1基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制研究

发布时间：2017-12-10 14:02

  本文关键词：沉默FBI-1基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制研究

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【摘要】：目的:本研究旨在探讨人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1(factor that binds to the inducer of short transcripts of human immunodeficiency virus-1,FBI-1)在人乳腺癌细胞中的表达,并研究靶向沉默FBI-1基因表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:1、应用qRT-PCR和Western blot检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A、人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231中FBI-1的表达水平。2、采用sh RNA慢病毒干扰技术构建沉默FBI-1基因的人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231稳定转染细胞株,并通过qRT-PCR和Western blot方法进行验证。3、采用CCK-8法、平板克隆形成实验检测沉默FBI-1基因对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术检测沉默FBI-1基因对MCF-7、MDA-MB-231细胞周期及凋亡的影响。4、通过qRT-PCR和Western blot检测FBI-1沉默前后凋亡相关因子survivin及NF-κBp65的表达水平,初步探讨沉默FBI-1基因对人乳腺癌细胞增殖及凋亡影响的机制。结果:1、qRT-PCR及Western blot法检测发现FBI-1在人乳腺癌细胞株MCF-7及MDA-MB-231中高表达,差异有统计学意义(P0.05)。2、利用RNAi技术,成功构建沉默FBI-1的慢病毒颗粒并转染人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231,分别采用qRT-PCR和Western blot检测sh RNA的沉默效果。发现Lv-sh FBI-1-2慢病毒颗粒沉默效果最好,差异具有统计学意义(P0.05),选用Lv-sh FBI-1-2慢病毒感染人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行后续实验。3、沉默FBI-1可抑制人乳腺癌细胞增殖能力:CCK8结果显示,沉默FBI-1基因的表达后,沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1细胞的增殖能力较空载组MCF-7/sh RNA-NC细胞及空白对照组MCF-7细胞均明显下降,差异有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验结果显示沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1的细胞克隆形成率(37.000±4.885)%低于空白对照组MCF-7(59.918±3.214)%和空载组MCF-7/sh RNA-NC(54.753±4.057)%,差异有统计学意义(P0.05)。MDA-MB-231细胞得出一样的结论。4、沉默FBI-1可阻滞人乳腺癌细胞周期:流式细胞术检测细胞周期结果显示空白对照组MCF-7和空载组MCF-7/sh RNA-NC细胞G0/G1期细胞比例分别为(59.257±2.222)%、(60.210±0.795)%,较沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1细胞(72.993±0.401)%低,同样空白对照组MDA-MB-231和空载组MDA-MB-231/sh RNA-NC细胞G0/G1期细胞比例低于沉默组MDA-MB-231/sh RNA-FBI-1细胞,差异有统计学意义(P0.05),可见沉默FBI-1基因可阻滞MCF-7、MDA-MB-231细胞于G0/G1期。5、沉默FBI-1可诱导人乳腺癌细胞凋亡:流式细胞术检测细胞凋亡结果显示沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1细胞凋亡率(5.140±0.478)%较空白对照组MCF-7(3.683±0.608)%及空载组MCF-7/sh RNA-NC(2.840±0.221)高,同样沉默组MDA-MB-231/sh RNA-FBI-1细胞凋亡率高于空白对照组MDA-MB-231及空载组MDA-MB-231/sh RNA-NC,差异有统计学意义(P0.05)。6、相关机制的研究:qRT-PCR结果显示沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1中survivin、NF-κBp65 m RNA的相对表达量低于空白对照组MCF-7与空载组MCF-7/sh RNA-NC,差异具有统计学(P0.05)。Western blot结果显示,沉默组MCF-7/sh RNA-FBI-1中survivin、NF-κBp65蛋白的相对表达量低于空白对照组MCF-7及空载组MCF-7/sh RNA-NC,差异具有统计学意义(P0.05)。MDA-MB-231细胞得出相同结论。结论:1、人乳腺癌细胞中FBI-1基因呈高表达水平。2、沉默FBI-1基因可抑制人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖能力,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。3、沉默FBI-1基因对人乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响可能与抑制survivin的表达及抑制NF-κB通路有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：1274700