miR-3568对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及分子机制研究

发布时间：2017-12-16 01:05

  本文关键词：miR-3568对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及分子机制研究

  更多相关文章： AS miR-3568 PDGF-BB 血管平滑肌细胞

【摘要】：目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)被定义为一种慢性炎症性血管疾病,其发生机制目前仍不完全清楚。基于对动脉粥样硬化发病原因的研究,其发病过程中主要是血管腔由脂质堆积而变得狭窄,狭窄过程中有多种因素参与其中并发挥作用。如炎症细胞及相关生长因子、脂质循环与累积、血清与机械力刺激等。在这些因素作用下,首先导致内皮细胞功能障碍,受损的内皮会有趋化因子分泌,并在内膜开始募集炎性因子。其次是单核细胞浸润,活化巨噬细胞释放炎性介质,内膜受到进一步损伤,最后在内膜层有血管平滑肌细胞移行和增殖的现象发生,造成管壁斑块的形成。所以,血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)的增殖与迁移是斑块形成与脱落并造成血栓的重要环节,防止平滑肌细胞过度的增殖与迁移是阻断AS发生的关键。目前已有大量的研究结果表明,AS的发生机制主要是由于内皮细胞的受损、脱落,致使血小板附着于损伤处,并伴有血小板衍生生长因子(Platelet-Derived Growth Factor,PDGF)的释放,刺激动脉的VSMC由原来所处的位置逐步向内膜的移行、增生等。移行与增生的VSMC和大量沉积的脂质共同导致了AS疾病的发生,因此VSMC在AS发生发展过程中发挥着不可缺少的作用。然而VSMC的影响因素有很多,本文主要探究微小核糖核酸对其功能的影响。微小核糖核酸(microRNA或miRNA)是一种非编码的单链小RNA分子,在动植物的基因组中均有所表达。对miRNA的生物学功能的研究与了解是不断发展的,作为一种调节因子,主要参与到转录后基因的表达,同时是一种负调控因子。其作用机制是具有选择性的,可以直接对靶标信使RNA降解,或者降低信使RNA的稳定性,从而发挥其相应的功能。近年来对于miRNA的研讨有很多,心血管疾病尤其是动脉粥样硬化疾病的发生发展与miRNA的关系越来越密切。而miRNA-3568是近年新发现的一种单链小分子RNA,与心血管疾病尤其是动脉粥样硬化疾病的发生发展的联系尚未见报道。本研究主要探究miRNA-3568与动脉粥样硬化尤其是对平滑肌细胞的作用及其相关机制,以期为干预AS的发生、发展及医治提供新的思路。方法:1.利用瞬时转染技术将miR-3568在大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(A7r5)抑制和过表达。2.运用实时定量PCR技术观测A7r5细胞中miR-3568在PDGF-BB刺激下表达量的变化。3.Western Blot法分析Akt、Fox O1、ERK蛋白表达的变化。4.采用MTT方法检测miR-3568对A7r5细胞增殖的影响。5.采用Boyden’s Chamber实验观察miR-3568对A7r5细胞迁移的影响。6.采用Dual luciferase Report实验验证miR-3568的靶基因。结果:1.转染Anti-miR-3568组能明显抑制A7r5细胞中miR-3568的表达量。而转染Pre-miR-3568能增加A7r5细胞中miR-3568表达量。2.实时定量PCR结果说明:在PDGF-BB刺激下,miR-3568在A7r5细胞中表达量降低。3.Western Blot实验结果表明:在PDGF-BB刺激下,转染Anti-miR-3568对A7r5细胞的p-Akt、p-ERK和p-Fox O1表达量有上调作用。4.MTT实验表明:Anti-miR-3568具有促进A7r5细胞增殖的作用。加入PI3K的抑制剂(BEZ-235)后,细胞增殖作用受到抑制。但Pre-miR-3568对A7r5细胞的增殖没有明显的影响。5.Boyden’s Chamber实验表明:Anti-miR-3568具有促进A7r5细胞迁移的作用。BEZ-235处理细胞后,细胞的迁移作用被抑制。但Pre-miR-3568对A7r5细胞迁移无明显影响。6.Dual luciferase Report实验结果显示:miR-3568与Fox O1没有明显的靶向关系。结论:1.下调miR-3568对A7r5细胞增殖和迁移具有明显的促进作用。而miR-3568对A7r5的作用效果不明显。2.下调miR-3568对A7r5细胞增殖和迁移的影响是通过Akt/Fox O1信号通路发挥作用的。3.下调miR-3568对p-ERK的蛋白水平表达有上调作用。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R543.5

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Verena Stiegelbauer;Samantha Perakis;Alexander Deutsch;Hui Ling;Armin Gerger;Martin Pichler;;MicroRNAs as novel predictive biomarkers and therapeutic targets in colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

，

本文编号：1294093