高氧通过CHOP介导的内质网应激途径参与AECⅡ凋亡

发布时间：2017-12-18 03:28

  本文关键词：高氧通过CHOP介导的内质网应激途径参与AECⅡ凋亡

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【摘要】：目的多种危险因素包括高氧作用于早产儿,特别小早产儿不成熟的肺组织可导致支气管肺发育不良(BPD)的发生。肺泡II型上皮细胞(AECⅡ)形态及功能变化在肺发育和BPD发生发展中发挥重要作用,内质网应激(ERS)凋亡途径参与多种疾病病理过程,其中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)是ERS重要下游信号通路。本研究拟利用原代培养AECⅡ探讨CHOP介导ERS途径对高氧暴露诱导的AECⅡ凋亡的影响。方法SD雌雄大鼠交配,雌鼠孕19~20 d时剖腹取胎鼠,取胎鼠肺组织培养AECⅡ原代细胞用于后续实验。原代AECⅡ随机分为空气组、高氧组,细胞培养24、48及72 h后收集两组细胞,其中高氧组经过95%高氧处理,而空气组直接暴露于空气中,两组细胞分别经倒置相差显微镜观察形态学改变,Annexin V/PI双染流式细胞术检测AECⅡ凋亡,qRT-PCR及Western blot分别检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子4(ATF4)、需肌醇酶1(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白1(XBP1)、激酶R样内质网激酶(PERK)及C/EBP同源蛋白(CHOP)等mRNA及蛋白质表达情况,及免疫荧光法观察CHOP定位及表达。结果(1)AECⅡ原代培养:成功利用胎肺组织培育出原代AECⅡ细胞。(2)AECⅡ高氧损伤模型建立:高氧暴露后,AECⅡ透光度减少,细胞逐渐伸展,形态表现不规则,细胞内点状颗粒聚集,呈空泡化改变的细胞增多,且呈漂浮状态的死细胞增多。(3)AECⅡ细胞凋亡:在各时间点,空气组AECⅡ凋亡不明显,同时间点高氧组AECⅡ凋亡率则显著增加,且给氧时间越长AECⅡ凋亡率越高(P均0.05)。(4)qRT-PCR检测GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4 mRNA的表达:各时间点,GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4 mRNA在高氧暴露组AECⅡ中表达较同时间点空气组均明显增加,差异有统计学意义(P均0.05)。且经高氧处理时间延长,各待检测因子mRNA表达水平渐增加(P均0.05)。(6)Western blot检测GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4的表达:与同时间点空气组相比,高氧暴露组各时间点AECⅡ中GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P均0.05)。且高氧组各因子蛋白表达含量随着给氧时间加长呈逐渐上升趋势(P均0.05)。(7)免疫荧光检测CHOP表达:结果示在各个时间点,高氧组荧光强度明显强于空气组,提示氧暴露后CHOP表达量较前增多,而空气组CHOP表达均不明显荧光强度弱(P均0.05)。结论(1)高氧暴露可增加原代培养AECⅡ细胞凋亡率。(2)高氧暴露可启动ERS参与原代培养AECⅡ凋亡。(3)CHOP介导的ERS途径可能参与高氧暴露后AECⅡ凋亡发生。(4)这三条信号通路,包括PERK、IRE1及ATF6,可能均在CHOP介导的AECⅡ凋亡中发挥着重要作用。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R722.6

【参考文献】

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1 早产儿支气管肺发育不良调查协作组;容志惠;常立文;傅万海;张U，

本文编号：1302644