miR-145对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

发布时间：2017-12-18 12:38

  本文关键词：miR-145对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

  更多相关文章： 卵巢癌 裸鼠 microRNA-145 MUC1 EMT

【摘要】：目的:探讨miR-145对卵巢癌SKOV3细胞侵袭迁移的影响及可能的作用机制,为临床治疗卵巢癌提供一个新的方向。方法:(1)稳定表达miR-145的细胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及阴性对照细胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3)的建立:以慢病毒作为载体进行包装,慢病毒感染SKOV3细胞,puromycin筛选稳定的细胞系,挑取单克隆及扩大培养,强分泌目的蛋白的细胞株的多次筛选,获取稳定表达miR-145细胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)以及阴性对照组(mock-CMW-RFP-SKOV3);(2)SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立及裸鼠的体内实验:SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立,观察裸鼠皮下肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线;生物发光活体成像技术示踪裸鼠移植瘤模型中的卵巢癌生长及扩散;处死小鼠获取肿瘤组织,用Western Blot方法检测各组肿瘤组织中MUC1以及EMT标志性蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin)的表达水平。结果:成功的构建了稳定表达miR-145及红色荧光蛋白的细胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及表达无意义序列及红色荧光蛋白的阴性对照细胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3);成功的建立三组SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型;绘制肿瘤生长曲线:与空白对照组(SKOV3)比,实验组(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)裸鼠肿瘤体积明显减小,差异有统计学意义(P0.01)。与空白对照组(SKOV3)比,阴性对照组(mock-CMW-RFP-SKOV3)的裸鼠肿瘤体积有减小但差异无统计学意义(P0.05);细胞接种肿瘤体积随时间延长而增大,而构建的稳定表达细胞株(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)的实验组在接种5d后均有荧光素酶表达,而阴性对照组(mock-CMW-RFP-SKOV3)的荧光素酶表达量远远超过实验组(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)。随着接种天数的增加,细胞浓度递增,荧光素的表达量快速增加;Western Blot检测实验组(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)的MUC1、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin的蛋白表达量明显减少,而E-cadherin的表达量增加。结论:本实验成功构建稳定表达miR-145及红色荧光蛋白的细胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及表达无意义序列及红色荧光蛋白的阴性对照细胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3)。经裸鼠体内实验表明,miR-145的高表达抑制SKOV3细胞移植瘤的生长。稳定高表达的miR-145可使卵巢癌细胞中MUC1蛋白表达量下降,E-cadherin表达量增加,N-cadherin、Fibronectin、Vimentin的蛋白表达量明显减少,推测miR-145可能通过抑制肿瘤细胞的EMT过程,从而抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移能力。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

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本文编号：1304204