激活素A对匹鲁卡品诱导的原代皮质神经元损伤的保护作用的研究

发布时间：2017-12-19 17:22

  本文关键词：激活素A对匹鲁卡品诱导的原代皮质神经元损伤的保护作用的研究　出处：《吉林大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:癫痫是一种常见的慢性神经系统疾病,由神经元网络异常放电引起,其发病机制十分复杂,至今仍未完全阐明。谷氨酸是脑中最重要的一种兴奋性神经递质,主要是通过谷氨酸受体介导发挥作用。本课题通过建立匹鲁卡品诱导原代皮质神经元癫痫模型,观察记录神经元的形态学变化,检测各组神经元离子型谷氨酸受体不同亚基m RNA及蛋白的表达变化,进而探讨离子型谷氨酸受体与癫痫之间、激活素A与离子型谷氨酸受体之间的关系。方法:分离孕16d Wistar大鼠胎鼠原代皮质神经元,培养至14d,鉴定并分组。模型组:匹鲁卡品3m M处理原代神经元24h。激活素A处理组:采用不同浓度的激活素A(5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)处理神经元24h。匹鲁卡品+激活素A组:匹鲁卡品3m M处理原代神经元24h后采用不同浓度的激活素A(5 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)处理神经元24h。对照组不做任何处理。通过神经元的形态学改变、全细胞膜片钳技术检测模型是否成功,RT-PCR、免疫荧光细胞化学染色、Western Blot等方法检测离子型谷氨酸受体各亚基的表达变化,探讨离子型谷氨酸受体在癫痫神经元损伤过程中可能的作用机制以及激活素A对神经元的保护作用。结果:1、形态学实验结果显示,激活素A能够增加体外培养的原代皮质神经元初级树突的数目和长度。2、匹鲁卡品3m M诱导原代皮质神经元损伤后,神经元初级树突的数目和长度减少,并有痫样放电。激活素A可以促进损伤后初级树突数目和长度生长。3、RT-PCR结果显示,不同浓度的激活素A(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)处理原代皮质神经元24h,谷氨酸受体的NR1、NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R2、Glu R4亚基m RNA表达水平与对照组相比几乎没有变化;而Glu R3亚基m RNA表达水平增加。模型组NR1、NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R3、Glu R4亚基m RNA的表达水平显著降低;而Glu R2 m RNA的表达水平没有变化。匹鲁卡品+激活素A组,当激活素A的浓度为10ng/ml、20ng/ml时,谷氨酸受体的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R3、Glu R4亚基m RNA表达水平与模型组相比均显著增加。4、免疫荧光细胞化学染色结果显示,与对照组相比原代皮质神经元经激活素A处理后,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亚基蛋白表达水平几乎没有变化。模型组,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亚基蛋白的表达水平显著降低。匹鲁卡品+激活素A组,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亚基蛋白表达水平与模型组相比均显著升高。5、Western Blot结果显示,原代皮质神经元经激活素A处理后,NR2B、Glu R1蛋白表达几乎没有变化。模型组NR2B、Glu R1蛋白的表达显著降低。匹鲁卡品+激活素A组,NR2B、Glu R1蛋白表达水平与损伤组相比均显著升高。结论:1、匹鲁卡品可以诱导体外培养的原代皮质神经元痫样放电,建立体外原代皮质神经元癫痫模型。2、离子型谷氨酸受体的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亚基参与了匹鲁卡品诱导的原代皮质神经元损伤过程。3、激活素A通过离子型谷氨酸受体的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亚基对匹鲁卡品诱导的原代皮质神经元损伤发挥保护作用。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R742.1

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本文编号：1308789