四环素类抗生素多西环素对人骨髓瘤细胞的抑制作用以及相应机制的研究

发布时间：2017-12-20 06:27

  本文关键词：四环素类抗生素多西环素对人骨髓瘤细胞的抑制作用以及相应机制的研究　出处：《江苏大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的多西环素(Doxycycline,DOX)是一常用的四环素类抗生素,其对多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞的抑制作用目前尚未有报道。本研究探讨DOX对MM细胞株H929和U266细胞增殖的影响及相关机制。方法1、MTT法观察DOX对H929和U266细胞增殖的影响。共设1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L六个不同的DOX浓度梯度,并设24h、48h、72h三个时间点;选用无DOX处理的作为阴性对照组,同时设置空白对照组。检测各组不同时间点吸光度值,计算细胞增殖抑制率。2、Western Blot法检测DOX处理H929和U266细胞后PARP、p-Stat1、pAkt、p-Erk1/2表达。实验分成四组:1)对照组A:无DOX处理组。2)实验组B:2.5mg/L的DOX处理MM细胞株3d。3)实验组C:5mg/L的DOX处理MM细胞株3d。4)实验组D:10mg/L的DOX处理MM细胞株3d。3、MTT法测定DOX联合Akt信号通路抑制剂哌立福辛(Perifosine)或单独Perifosine对U266细胞增殖的影响。对于联合处理组先单独用Perifosine处理U266细胞4h后,换不含Perifosine的、含5mg/L DOX的培养液处理3d。检测吸光度值,计算细胞增殖抑制率,研究Perifosine是否影响DOX对U266细胞株的增殖抑制作用。4、Western Blot法检测Perifosine处理U266细胞后p-Akt的表达。设Perifosine处理U266细胞株4h后立即检测组;先Perifosine处理4h后,换不含抑制的培养液继续培养3d组;持续5μM的Perifosine处理U266细胞株3d组;阴性对照组。检测各组U266细胞p-Akt蛋白的表达水平,研究Perifosine抑制Akt作用是否可逆。5、Western Blot法检测DOX联合Perifosine或单独处理U266细胞后对pAkt表达的影响。设单独5mg/L的DOX处理3d组和Perifosine处理4h后,再单独DOX处理3d组;以无任何药物处理组为阴性对照组。检测各组U266细胞pAkt表达水平,研究Perifosine是否可以抑制DOX上调p-Akt表达的作用。6、Real-time-PCR法测定DOX处理U266细胞后c-Jun和c-Fos基因表达。A组、B组、C组和D组细胞在DOX处理结束后,提取各组总RNA,测定四组细胞中c-Jun和c-Fos表达水平。结果1、不同浓度DOX分别作用MM细胞不同时间后,MTT结果表明随着DOX浓度和时间的增加,H929和U266细胞增殖抑制率增加(P0.05),提示DOX可抑制MM细胞株H929和U266细胞的增殖,并且这种抑制作用呈现时间-剂量依赖关系。2、与对照组比较,DOX处理后可抑制H929和U266细胞p-Erk1/2表达(P0.05),上调H929细胞中p-Stat1表达(P0.05),而对U266细胞p-Stat1的表达和这两种细胞株PARP的表达无明显改变;2.5和5mg/L浓度的DOX可以上调MM细胞株p-Akt的表达(P0.05),这一上调作用可以被Akt通路抑制剂Perifosine所阻断,并且这种抑制Akt的作用呈现不可逆性。此外,MTT结果还提示Perifosine可增强DOX对U266细胞株的增殖抑制作用。3、Real-time-PCR结果表明:DOX处理U266细胞后c-Fos基因mRNA表达水平下调(P0.05)。结论1、DOX对H929和U266细胞的增殖有抑制作用,并且其抑制作用有明显的时间剂量依赖性。2、DOX可以影响MM细胞中与细胞增殖有关的Erk、Stat、Akt信号通路。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.3

【参考文献】

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本文编号：1311078