石榴皮安石榴苷的制备及其亚急性毒性实验和肝毒性机制的初步研究

发布时间：2017-12-20 14:29

  本文关键词：石榴皮安石榴苷的制备及其亚急性毒性实验和肝毒性机制的初步研究　出处：《新疆医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:1.考察石榴皮多酚提取物亚急性毒性,初步评价其安全性,为长期毒性实验的剂量设计提供依据。2.通过HPLC指纹图谱方法,对喀什和田两地不同批次的石榴皮药材进行相似度分析。3.通过纯化工艺制备石榴皮安石榴苷精制物。4.石榴皮安石榴苷精制物对LDLr-/-小鼠给药三个月的毒性考察。5.初步探讨石榴皮安石榴苷精制物致胆汁淤积型肝毒性的机制。方法:1.石榴皮多酚提取物给药30 d,记录各组小鼠的一般活动情况、监测体重、食物消耗量及毒性反应,给药末期禁食24 h剖杀2/3的小鼠,剩余小鼠恢复观察2 W后剖杀。检测给药期和恢复期小鼠的血液学指标及生化指标,HE染色观察肝脏形态学变化。2.对HPLC指纹图谱方法的精密度、稳定性、重复性进行考察,对喀什和田两地不同批次的石榴皮药材进行相似度分析。3.筛选喀什和田两地的石榴皮药材,进行安石榴苷的制备并通过HPLC检测安石榴苷含量。4.石榴皮安石榴苷精制物对LDLr-/-小鼠3个月毒性实验,监测体重,解剖时对脏器外观大体观察,检测生化指标,病理组织学检查。5.QRT-PCR法探讨胆汁转运受体的MRP-3、BESP、MRP-2、CYP7A1、PPARα五项经典的转运通路mRNA表达量。结果:1.亚急性毒性试验期间,各组小鼠生长活动正常。给药期结束时,各剂量组小鼠体重增重、食物利用率与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05);血液学指标及血生化指标均无显著特异性的差异。给药末期各剂量组与空白对照组小鼠的肝脏系数比较有显著统计学差异(P0.01),而恢复期观察中只有中、高剂量组小鼠的肝脏系数与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),在恢复期肝脏病理切片观察中高剂量组小鼠肝脏有毒性表现,即肝细胞点状坏死伴炎症细胞的反应,可见部分肝小叶中央静脉轻度扩张并淤血,肝窦内kuffer细胞明显增生,汇管区可见炎症细胞浸润。2.石榴皮药材指纹图谱,方法学验证结果表明石榴皮药材HPLC指纹图谱精密度、稳定性、重复性均符合要求,12批石榴皮药材相似度较高,不同石榴皮药材在化学成分的组成上基本一样。3.喀什石榴皮药材所含安石榴苷成分略高于和田石榴皮,相同工艺用喀什石榴皮制备的安石榴苷含量均在80%以上。4.石榴皮安石榴苷精制物给药3个月后,病理组织学检查中HFD+PU=500mg/kg·d剂量组、HFD+PU=750mg/kg·d剂量组的小鼠肝脏显示胆汁淤积型肝损伤。5.QRT-PCR实验中BESP的mRNA表达量显示下调,MRP2的mRNA表达量显示下调,MRP3的mRNA表达量显示上调,CPY7A1的mRNA的表达量显示下调,PPARα的mRNA的表达量显示上调。结论:石榴皮多酚提取物亚急性毒性实验中高剂量下表现肝毒性。喀什和田两地各批次的石榴皮药材相似。喀什石榴皮安石榴苷含量均在80%高于和田石榴皮药材的安石榴苷含量。石榴皮安石榴苷干预LDLr-/-小鼠3个月,在肝脏病理切片中,高剂量组HFD+PU=500mg/kg·d组和HFD+PU=750mg/kg·d组表现出胆汁淤积型肝损伤。对石榴皮安石榴苷致胆汁淤积肝损伤机制探讨中由于MRP3转运底物与MRP2有着广泛的同源性,所以认为MRP3的高表达是对MRP2功能削弱的一种代偿。提示需进一步对基因芯片筛查所得的石榴皮多酚与肝毒性特异性相关基因的mRNA表达进行观察,也可采用Western blot检测肝脏组织中相关蛋白的表达,拟从基因水平和蛋白水平充分探讨供试物致胆汁淤积型肝毒性的机制。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285.5

【参考文献】

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本文编号：1312437