降胆固醇乳酸菌的筛选及其对高脂饮食小鼠的影响

发布时间：2017-12-22 22:18

本文关键词：降胆固醇乳酸菌的筛选及其对高脂饮食小鼠的影响　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：近年来随着人们生活水平的不断提高和日常饮食结构的改变,胆固醇摄入过高已经导致了种种健康问题,例如心脑血管疾病,因此降低人体中的胆固醇含量对人类的健康非常重要。本研究的主要内容是从泡菜、酸奶、发酵香肠等传统发酵食品中分离纯化出多株乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB),并通过体外降胆固醇实验进行筛选,挑选出其中降胆固醇效果较好的几株菌进行酸耐受性、胆盐耐受性以及细胞吸附能力的测定,并从中筛选出一株综合性能较好的菌株作为目标菌株。然后,对目标菌株进行形态学、生理生化及遗传学鉴定,并检测目标菌株对高脂饮食小鼠的影响,为菌株的进一步开发应用奠定科学的理论基础。实验结果如下:(1)利用梯度稀释、平板划线等方法从样品中分离纯化得到具有产酸能力、革兰氏阳性和过氧化氢酶阴性的79株乳酸菌菌株。(2)体外降胆固醇能力的测定。将活化的各菌株接种到高胆固醇培养基(MRS-CHO,含100μg/m L胆固醇、0.2%胆盐、0.1%巯基乙酸钠)中厌氧培养,利用邻苯二甲醛方法测定上清液中胆固醇的含量,计算胆固醇的去除率。筛选结果显示菌株LPN5、LP130、LP96、LPZ、LPB、LP37、LP157、LP183、LPN21和LP192B具有较强的降胆固醇能力,这10株菌株通过16S rDNA序列分析进行了初步鉴定,其中菌株LPN5、LP130、LP96、LPZ和LPB属于植物乳杆菌,LP37、LP157、LP183、LPN21和LP192B属于戊糖片球菌。(3)酸耐受性、胆盐耐受性以及细胞吸附能力的测定。将活化后的菌株分别接种到含有0.1%、0.2%、0.3%胆盐的MRS培养基和pH3.0的MRS培养基中培养3h,计算菌株的存活率。结果发现这十株菌对酸(pH3.0)的耐受性都较好(存活率在80%以上);菌株LP96和LP157对胆盐的耐受性最高,在含有0.3%胆盐的培养基中存活率分别为25.07%、25.36%;菌株LP37、LPN21、LP96对细胞的吸附能力较强,在每个细胞上平均吸附的菌体数分别为145.67、140.26、73.21。综合分析以上结果,菌株LP96的综合性质比较好,被选作目标菌株进行下一步的实验。(4)目标菌株的鉴定。通过进行形态学、生理生化和遗传学鉴定,目标菌株LP96被鉴定为植物乳杆菌。(5)菌株LP96体外降胆固醇机制的初步研究。将不同状态下的LP96菌体进行降胆固醇主要作用的分析,研究不同培养基中培养的LP96对超声波的抗性,结果表明不同状态下的菌体降胆固醇的机制不同,培养基中的胆固醇可以提高菌体对超声波的抗性。(6)目标菌株对高脂饮食小鼠的影响。将菌株LP96活化后,制成不同浓度的菌悬液,每天按照小鼠的分组进行处理。实验进行6周,实验中每周称量小鼠体重。在实验的最后一天,小鼠禁食12h后被处死,收集血液、肝脏、肾脏、脾脏和盲肠里的新鲜粪便等样品。将样品收集处理后,测定各个样品的指标:血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量,肝组织的TC、TG的含量,新鲜粪便里的大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌的活菌数。实验结果表明菌株LP96可以降低血清中TG、TC和LDL-C的含量,可以有效降低肝脏的TG、TC含量,可以有效提高血液的抗氧化能力,提高肠道维持菌群平衡的能力。(7)目标菌株的发酵性能测定。测定菌株LP96在脱脂乳中的酸度、pH、活菌数和蛋白质降解能力的变化情况,结果表明LP96在脱脂乳中具有发酵潜能。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R371

【参考文献】