人乳头瘤病毒33亚型L1蛋白的重组表达及免疫原性鉴定
本文关键词：人乳头瘤病毒33亚型L1蛋白的重组表达及免疫原性鉴定 出处：《郑州大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率仅比乳腺癌低。该病的发生与人乳头瘤病毒(Human papillomavius,HPV)的感染关系很密切。HPV属于乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)、乳头瘤空泡病毒A属,是一类没有囊膜的双链小分子DNA病毒。该病毒种属特异性严格,主要感染人的皮肤和粘膜组织,并引起相应部位上皮组织的增生性病变。HPV病毒的主要衣壳蛋白L1可以自组装成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),该颗粒结构与天然病毒颗粒相似,能够诱导机体发生免疫反应产生保护性抗体,因此体外表达的L1蛋白自组装形成的VLPs可以作为HPV预防性疫苗使用。目前已上市的HPV预防性疫苗主要来源于昆虫细胞或酵母细胞,但是其生产工艺复杂,免疫成本高,因此新的更为经济的HPV L1蛋白的制备方法是目前HPV疫苗研究的热点。本研究分别采用水稻胚乳表达系统和大肠杆菌表达系统对HPV33 L1蛋白进行表达,旨在寻找一种更为经济的HPV33 L1蛋白的制备方法。本研究结合水稻胚乳生物反应器的优点,将HPV33 L1基因转入植物表达系统,成功构建含有HPV33 L1基因的植物表达载体,这为实现HPV33 L1蛋白在水稻胚乳表达系统中的表达奠定了基础。同时,本研究成功构建含有HPV33 L1基因的原核重组表达载体PE-HPV33-L1,采用化学转化法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞BL21制备重组表达菌株,然后通过优化诱导剂IPTG的浓度、诱导时间以及诱导温度等条件,筛选出最佳诱导条件。在IPTG浓度0.3 mmol/L、温度18℃、培养时间16 h条件下,L1重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量最高,约240mg/L,经Ni-NTA亲和色谱法纯化可获得纯度达90%的目的蛋白。电镜检测结果显示HPV33 L1蛋白在体外能自发形成VLPs,用纯化的HPV33 VLPs免疫昆明鼠,然后用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked imumunosorbent assay,ELISA)分析免疫效果,结果显示小鼠免疫后血清效价约达1:89600,这说明通过大肠杆菌获得的HPV33 L1 VLPs能有效刺激机体产生高滴度的特异性抗体,为HPV33疫苗的研制奠定了基础。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R373
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，本文编号：1323268
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