萝卜硫素对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移影响的研究

发布时间：2017-12-24 06:29

本文关键词：萝卜硫素对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移影响的研究　出处：《广西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是临床上的一种较为常见的疾病,其病因十分复杂,可由多种心、肺或肺血管疾病等引起。肺血管阻力升高是PH的重要特征。肺血管重塑是肺血管阻力增加的一个重要病理学因素,而血管平滑肌细胞异常增殖和迁移是血管重塑的重要病理基础。慢性缺氧可以使肺血管收缩、血管壁的张力增高,另外缺氧时肺内会产生很多种细胞因子及生长因子,可以直接作用刺激血管壁平滑肌细胞以及内膜弹力纤维增生,最终导致肺血管阻力增高。舒张肺血管、缓解肺血管重塑是目前临床药物治疗PH的重要措施。本研究通过设计缺氧细胞实验模型,探讨萝卜硫素是否对肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移存在抑制作用,为肺动脉高压的药物治疗提供参考信息。方法购买原代人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC),常规培养、传代,选取4-6代处于对数生长期生长状态良好的细胞用于实验。1.MTT法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC增殖的影响。随机将实验分为6组:实验组A往细胞加入0.5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组D往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组E往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按实验分组加入对应的药物后,放进缺氧环境内培养12h、24h、48h、72h后,用MTT法检测细胞的吸光度(OD值),然后计算出HPASMC的增殖抑制率。2.用Transwell小室法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC的迁移情况。随机将实验分为5组:实验组A往细胞加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组D往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物,将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。用Transwell小室的方法,最后得出各组HPASMC的迁移数。3.用Western Blot法测定萝卜硫素对缺氧HPASMC p38蛋白的表达情况。随机将实验分为4组:实验组A往细胞加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物,将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。常规提取细胞总蛋白,按Western Blot法得到p38蛋白和β-Actin蛋白的灰度条带。最后对凝胶图像进行分析得到p38蛋白的相对表达量。结果1.MTT法检测HPASMC增殖结果显示,实验组A、B、C、D、E的HPASMC的细胞增殖抑制率均比对照组高(P0.05);对于细胞增殖抑制率,实验组A比对照组高(P0.05),实验组B比实验组A高(P0.05),实验组C比实验组B高(P0.05),实验组D比实验组C高(P0.05),实验组E比实验组D高(P0.05)。各个浓度组内,24h细胞增殖抑制率比12h高(P0.05),48h的比24h的高(P0.05),72h的比48h的高(P0.05)。2.Transwell小室法检测HPASMC迁移的结果显示,药物干预48h后,实验组A、B、C、D的HPASMC迁移数均比对照组少(P0.05);对于细胞迁移数,实验组A比对照组少(P0.05),实验组B比实验组A少(P0.05),实验组C比实验组B少(P0.05),实验组D比实验组C少(P0.05)。3.Western Blot法测定HPASMC中p38蛋白表达的结果显示,药物干预48h后,实验组A、B、C人肺动脉平滑肌细胞p38蛋白的表达均比实验组增少(P0.05);细胞内p38蛋白的表达量,实验组A比对照组少(P0.05),实验组B比实验组A少(P0.05),实验组C比实验组B少(P0.05)。结论萝卜硫素可以明显抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移,并可抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的p38蛋白表达。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R544.1

【参考文献】