生物钟基因BMAL1对鼻咽癌细胞CNE2增殖和放疗敏感性影响的研究
本文关键词：生物钟基因BMAL1对鼻咽癌细胞CNE2增殖和放疗敏感性影响的研究 出处：《贵州医科大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的:探讨生物钟基因BMAL1对鼻咽癌细胞CNE2增殖、凋亡和放疗敏感性的影响。方法:分别构建BMAL1基因干扰和过表达的慢病毒载体及阴性对照载体,将载体感染鼻咽癌细胞CNE2,加入嘌呤霉素筛选2周,构建BMAL1基因稳定干扰和过表达的鼻咽癌细胞CNE2及其阴性对照细胞,采用实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测BMAL1基因在mRNA和蛋白水平的干扰和过表达效果。细胞增殖和放疗抑制率采用CCK8实验进行检测;细胞凋亡和细胞周期采用流式细胞术进行检测;通过克隆形成实验检测BMAL1基因对不同剂量(0、2、4、6Gy)X射线照射后CNE2放疗敏感性的影响。结果:干扰慢病毒pGMLV-SB3 shRNA3能下调鼻咽癌细胞中BMAL1 mRNA和蛋白的表达量,干扰组mRNA表达量下调了 0.806倍(P=0.002),蛋白表达量下调了 0.831倍(P0.001);过表达慢病毒pGMLV-PA6-BMAL1能上调鼻咽癌细胞中BMAL1 mRNA和蛋白的表达量,过表达组mRNA表达量上调至7.191倍(P=0.003),蛋白表达量上调至2.503倍(P=0.031),差异具有统计学意义。细胞增殖实验显示,BMAL1基因表达降低后细胞增殖加快(P0.001),BMAL1表达升高后细胞增殖减慢(P0.001),差异具有统计学意义。BMAL1基因干扰组CNE2细胞放疗后的吸光度值高于阴性对照组(P0.001),放疗后抑制率低于阴性对照组(P=0.001);BMAL1基因过表达组放疗后的吸光度值低于阴性对照组(P0.001),放疗抑制率高于阴性对照组(P0.001),差异具有统计学意义。BMAL1基因干扰组的凋亡率低于对照组(P=0.007);BMAL1基因过表达组凋亡率高于阴性对照组(P=0.004),差异具有统计学意义。细胞周期分析结果显示,8Gy照射24h后,BMAL1基因干扰组CNE2细胞的S期比例较阴性对照组升高(P=0.001),BMAL1基因过表达组的S期比例较阴性对照组降低(P0.001),差异具有统计学意义;BMAL1基因干扰组的G2/M期比例较阴性对照组降低(P0.001),BMAL1基因过表达组的G2/M期比例较阴性对照组升高(P=0.001),差异具有统计学意义。8Gy放疗后48、72小时,各组细胞周期分布差异无统计学意义。克隆形成实验显示,BMAL1干扰组克隆形成率高于阴性对照组(P=0.032),存活分数高于阴性对照组(P=0.036),放射增敏比为0.521;BMAL1过表达组克隆形成率低于阴性对照组(P=0.042),存活分数低于阴性对照组(P=0.037),放射增敏比为1.794。结论:BMAL1基因可抑制鼻咽癌细胞CNE2的增殖,并通过降低S期比例、增加G2/M期阻滞从而增加放疗后细胞凋亡,提高放射敏感性。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.63
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本文编号：1332698
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