不同电针对AD小鼠额叶MG及相关促炎因子表达的影响

发布时间：2017-12-25 12:25

本文关键词：不同电针对AD小鼠额叶MG及相关促炎因子表达的影响　出处：《北京中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：1.研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer' s disease,AD),是一种早期临床症状不明显、慢性进行性发展的中枢神经系统退行性疾病,主要表现以认知功能障碍、记忆力减退为首发,继而出现语言障碍、行为异常、抽象思维损害等症状,是老年人痴呆的主要原因,在老年痴呆中的比例大约为50%～70%。截至目前,中国的阿尔茨海默患者数量及患者增长速度都位居世界第一,伴随着中国老龄化迅猛发展的趋势,这已经变成一个亟待解决的问题。AD的病机十分复杂,目前的主要假说有Aβ蛋白学说、基因突变学说、tau蛋白学说、胆碱能学说等,各种学说错综复杂,但是这些假说都不能全面的解释AD的发病机制,具体的作用机理至今仍然未得到阐明。随着相关研究的不断深入,发现无论在AD的哪个阶段都伴随着慢性炎症反应,这已经成为AD发病和病理特征形成的重要诱因,而小胶质细胞是AD炎症反应中最主要的细胞,因此近年来认为Aβ激活小胶质细胞所引起的炎症反应是AD发病的核心病理机制。本研究以抑制小胶质细胞活化为切入点,利用结合了中国传统针灸优势、克服了脉冲电针耐受性特点的音乐电针作为治疗手段,来探究有效治疗AD的新途径。2.研究目的本研究采用7月龄APP/PS1双转基因小鼠为研究模型,通过实验分析论证不同电针干预对AD小鼠额叶脑区小胶质细胞活化状态和相关炎性因子蛋白表达的影响,探讨"通督启神"法指导下的不同电针干预对改善脑内炎性反应及学习记忆能力的作用差异和可能的作用机理,为音乐电针在临床上的应用提供客观的实验依据,进一步补充"通督启神"法的学术思想。3.研究方法本实验采用动物实验法,研究模型为SPF级雄性7月龄APP/PS1双转基因小鼠36只,将小鼠采用随机数字法分为模型组、脉冲电针组和音乐电针组,共3组,以同月龄健康雄性C57BL/6小鼠作为正常组,每组12只,共36只。正常组:在同等饲养条件下不采取任何措施,但在对脉冲电针组和音乐电针组进行针刺治疗时抓取一次,同时一并用鼠套束缚20min。模型组同正常组。脉冲电针组:将小鼠放入自制鼠套,先取"人中"点刺,后取"百会"、"印堂"二穴,"印堂"向上、"百会"向下进行平刺(为防止短路,两针不能相碰),进针深度0.5cm,用HANS-202电针仪连接针柄,设定频率2Hz,电流强度0.1mA,以小鼠不挣扎撕咬保持镇静为宜,每次治疗20min,每天1次,共计15天。音乐电针组:与脉冲电针组采用相同针刺穴位与方法,用音乐电针仪与针柄相连接,针刺强度以针柄在小鼠头部的轻微颤动为宜,选用节奏轻快的抗痴呆音乐处方,每次治疗20min,共计15天。治疗15天后,采取Morris水迷宫实验法观察检测小鼠的行为学变化;采用免疫组织化学方法观察各组小鼠额叶脑区Iba-1标记的小胶质细胞活化情况;采用western blot方法检测小鼠额叶脑区TNF-α、IL-12B蛋白的相对表达含量。4.研究结果4.1 Morris水迷宫实验结果4.1.1定位航行实验结果正常组与模型组相比较,从实验第1天至实验第5天逃避潜伏期均呈明显下降趋势,且差异具有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,脉冲电针组实验第4天的逃避潜伏期出现具有统计学差异(P0.05),而音乐电针组的逃避潜伏期在第3天就已经明显下降(P0.05);第4天、第5天,与模型组相比,脉冲电针组和音乐电针组持续保持下降趋势(P0.05)(P0.01);音乐电针组相对于脉冲电针组的逃避潜伏期有下降的趋势,但两者之间没有统计学差异(P0.05)。4.1.2空间探索实验结果各组穿越平台次数,与模型组相比,正常组、脉冲电针组、音乐电针组小鼠穿越平台次数具有很明显的优势,有统计学差异(P0.01)(P0.01)(P0.01),而音乐电针组相对于脉冲电针组有上升的趋势,但没有统计学意义(P0.05)。各组模型小鼠在目标象限的游泳距离与总游泳距离的比值,正常组、脉冲电针组和音乐电针组小鼠与模型组相比较,比值均呈上升趋势,差异具有统计学意(P0.01)(P0.01)(P0.01),音乐电针组比脉冲电针组小鼠在比值上有更明显的优势,且差异有统计学意(P0.01)。4.2免疫组织化学法检测结果正常组Iba-1阳性表达量最低,小胶质细胞呈分枝状,胞体小且突起细长;模型组的小胶质细胞Iba-1阳性表达明显增强,阳性细胞数量明显增高,小胶质细胞呈椭圆形,胞体变大,突起变粗,呈现灌木丛高分支形状,与其他组相比,小胶质细胞活化量最高。与模型组相比,脉冲电针组和音乐电针组Iba-1阳性表达量明显减少(P0.05)(P0.05),且音乐电针组相对于脉冲电针组呈减少趋势(P0.05)。4.3 Western Blot法检测结果比较实验小鼠额叶区TNF-α蛋白相对表达含量。与正常组比较,模型组蛋白表达明显呈上升趋势(P0.01);脉冲电针组和音乐电针组的蛋白表达与模型组相比明显下降(P0.05)(P0.01);且音乐电针优于脉冲电针(P0.05)。比较实验小鼠额叶区IL-12B蛋白相对表达含量。与正常组比较,模型组的IL-12B蛋白表达明显增多(P0.01);与模型组相比,脉冲电针组和音乐电针组的蛋白表达呈下降趋势(P0.05)(P0.01);且音乐电针组优于脉冲电针组(P0.05)。5.研究结论(1)研究选取的7月龄APP/PS1双转基因小鼠,具有明显的学习记忆认知障碍,且促炎性因子表达较高,是研究AD炎性反应较理想的模型小鼠。(2)采取"通督启神"法指导下的脉冲电针和音乐电针进行针刺治疗,对于改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力方面效果显著,且音乐电针在改善模型小鼠学习记忆保持能力方面,要优于脉冲电针。(3)"通督启神"法音乐电针在抑制小胶质细胞活化,减少相关炎性因子TNF-α、IL-12的分泌、释放,进而改善脑内炎性反应方面优于脉冲电针,有更好的治疗效果。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R245

【参考文献】