丹参活性部位提取分离及心肌保护作用评价

发布时间：2017-12-26 13:34

本文关键词：丹参活性部位提取分离及心肌保护作用评价　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科鼠尾草属植物丹参干燥的根及根茎,具有非常广泛的药理作用,对冠心病,高血压,心肌梗死等心脑血管疾病,效果显著。我们熟知丹参中主要含有脂溶性丹参酮类和水溶性丹参酚酸类两大类化学成分。研究表明,在水溶性成分中含有一定量的糖蛋白。本论文主要研究丹参四个活性部位(总丹参酮部位、丹参总酚酸部位、丹参总酚酸与粗糖蛋白混合部位及粗糖蛋白部位)的分离,首次对比评价各活性部位的心肌保护作用。1.丹参活性部位提取工艺研究利用闪式提取器提取,采用紫外分光光度法测定总丹参酮、丹参总酚酸的含量。最终确定最佳提取工艺:提取倍数为12倍,提取次数为3次,提取溶剂浓度为75%乙醇。将所得浸膏,加适量的蒸馏水溶解制成混悬液,经石油醚萃取后,再利用石油醚-乙酸乙酯(3:1)萃取,浓缩、干燥得到总丹参酮部位(DSBW-1,总丹参酮含量为50.8%);将剩余的水相部分浓缩、干燥,加入5倍体积的75%乙醇提取,提取液浓缩、干燥得到丹参总酚酸与粗糖蛋白混合部位(DSBW-2,丹参总酚酸含量为40.8%,多糖含量20%);将DSBW-2加入适量60%乙醇溶解,过滤,滤液加入95%乙醇进行沉淀,4℃放置12 h,经4000 r/min转速离心5分钟,收集上清液,减压浓缩、干燥,得丹参总酚酸部位(DSBW-3,丹参总酚酸含量为54.3%);收集沉淀,减压浓缩、干燥,得粗糖蛋白部位(DSBW-4,多糖含量40.8%,蛋白质含量为6.08%)。2.丹参酚酸类物质分离工艺研究在课题组前期研究基础上,选用弱极性的大孔吸附树脂AB-8分离丹参酚酸类物质,依次加入蒸馏水、5%、10%、20%甲醇等梯度洗脱。最终确定丹参素主要集中在水部位,迷迭香酸、丹参酚酸B主要集中在20%甲醇馏分中。将所得馏分通过硅胶柱处理,选择洗脱剂乙酸乙酯-丙酮-10%甲酸(8:1:0.3)洗脱,分离得到丹参素、迷迭香酸及丹参酚酸B。3.丹参各活性部位对大鼠胸主动脉血管环的作用研究游离大鼠胸主动脉血管环,加入去甲肾上腺素使血管环收缩,张力值稳定后给予低剂量浓度100μg/mL、中剂量浓度500μg/mL、高剂量浓度1 mg/mL的丹参四个活性部位,通过信号采集系统,记录血管舒张百分比。结果显示,在浓度为1 mg/mL时,DSBW-3舒张作用最强,血管舒张百分比为55.67±3.09%;DSBW-1作用强度次之,血管舒张百分比为47.33±2.62%。4.丹参各活性部位对心肌细胞保护作用研究通过体外培养乳鼠的心肌细胞,建立缺血再灌注损伤模型。给予浓度为2.5、5和10μg/mL的丹参四个活性部位作用于模型细胞,通过检测细胞活力OD值,乳酸脱氢酶(LDH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)含量,对比评价丹参四个活性部位对心肌细胞的保护作用。研究结果表明,在药物浓度为10μg/mL时,DSBW-1对心肌细胞保护作用最强,与模型组相比,对IRI细胞具有明显的保护作用。本论文通过研究丹参各活性部位的提取分离工艺,为充分开发利用资源奠定了一定的基础;富集、分离丹参酚酸类物质,优化工艺研究,具有高效、节能和环保等意义;对比评价丹参四个活性部位对心肌保护作用,明确丹参各活性部位在心肌保护作用的主要贡献,为丹参在临床上的应用提供参考依据。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

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