CD20和PD-L1双靶向纳米免疫体系的构建及其抗淋巴瘤协同效应机制研究

发布时间：2018-01-03 00:13

  本文关键词：CD20和PD-L1双靶向纳米免疫体系的构建及其抗淋巴瘤协同效应机制研究　出处：《聊城大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 抗CD20抗体 抗PD-L1抗体 抗体团簇 药物介导的细胞毒性作用 细胞凋亡

【摘要】：利妥昔单抗(Rituximab)于1997年被FDA批准用于医疗使用,它是全球第一个被批准用于临床进行非霍奇金淋巴瘤(NHL)治疗的IgG1单克隆抗体。尽管Rituximab在前期肿瘤治疗方面取得了一定的疗效,但是,临床治疗中发现,抗CD20抗体在体内的半衰期短,作用效果温和,并且多次用药后容易产生耐药性。此外,由于免疫检查点的存在,肿瘤细胞容易发生免疫逃逸。因此,从抗体作用机制和肿瘤微环境出发,构建多功能抗体提高其疗效是临床抗体靶向治疗亟待解决的问题。近年来,随着纳米技术和材料科学的发展,基于纳米载体技术的递送系统为解决上述问题提供了完美的解决方案。本课题中,我们选用支化阳离子高分子聚乙烯亚胺(PEI,分子量为750 kDa),在其侧基NH2上修饰可与抗体反应的桥联键MAL-PEG-SCM分子,并大量偶联抗CD20和PD-L1抗体,构建CD20和PD-L1分子双靶向纳米抗体团簇体系(缩写简称PEI-RTX-AZL)。动静态光散射仪(Dynamic Laser Light Scattering,DLLS),透射电子显微镜(TEM),马尔文zeta电位仪等的测试结果证明了抗体团簇合成成功,其抗体的偶联效率为63%,具有椭球拓扑结构。抗体团簇与Daudi细胞的结合能力和解离能力的分析显示,与Rituximab相比,其具有相似的结合能力,但是对CD20分子的解离能力明显降低,也就是说抗体团簇可以更长时间的结合在靶细胞表面,持续作用时间更持久,这为进一步提升抗体疗效打下了基础。接下来,在体外抗肿瘤活性研究中,本课题惊喜的发现:抗体团簇PEI-RTX-AZL对Daudi细胞除了具有增殖抑制和细胞毒性作用外,还具有的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)和程序性细胞死亡(PCD)作用。本课题进一步的对抗体团簇的抗肿瘤作用机制进行了探索。相比游离的母代抗体,抗体团簇诱导Daudi细胞发生凋亡的过程可以概括为以下两方面:一方面,抗CD20抗体的Fab段特异性靶向CD20阳性的Daudi细胞,通过抗体Fc段与NK细胞等效应细胞的FcgR结合,启动ADCC作用,效应细胞攻击靶细胞,使其裂解;并将抗PD-L1抗体递送至肿瘤细胞表面,通过抗PD-L1抗体来阻断PD-1/PD-L1信号通路,恢复CTL细胞的抗肿瘤活性,两种抗体协同发挥抗肿瘤作用;另一方面,750 kDa的支状长链PEI在Rituximab抗体的靶向作用下,与CD20分子结合,使抗原发生交联或抗原受限,诱导靶细胞内的溶酶体破裂或分布弥散,释放溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin B)进入胞浆,Cathepsin B作用于线粒体,致使线粒体膜的通透性增大,从而释放前凋亡分子(细胞色素C)进入细胞浆,激活凋亡信号通路(如Caspase),诱导细胞发生凋亡级联反应。本课题还对抗体团簇的体内抗肿瘤效应开展了研究。为了更加直观地观察抗体团簇在动物水平的抗肿瘤作用,我们构建了Balb/c裸鼠的皮下实体肿瘤模型,并对抗体团簇PEI-RTX-AZL和单克隆抗体Rituximab的抑瘤效应进行了观察和分析。研究表明,抗体团簇组比单抗组具有更强的抗肿瘤效果,减轻肿瘤负荷。综上所述,抗体团簇通过抗CD20抗体特异性靶向肿瘤细胞,抗PD-L1抗体阻断PD-1/PD-L1信号通路,恢复CTL细胞的抗肿瘤活性,两种抗体协同发挥抗肿瘤作用,进一步增强增殖抑制、ADCC和PCD作用,从而充分发挥疗效。本课题通过系统的载体设计、抗体偶联、体外抗肿瘤机制和体内抑瘤效果等研究,为今后设计更加有效的能够临床应用的靶向治疗药物提供方法指导和理论依据。
[Abstract]:Anti - CD20 antibody has been approved by FDA in 1997 for medical use . It is the first IgG1 monoclonal antibody to be approved for clinical use in non - Hodgkin ' s lymphoma ( NHL ) . In order to observe the anti - tumor effect of anti - CD20 antibody , the anti - PD - L1 antibody block PD - 1 / PD - L1 signaling pathway , and the anti - tumor effect of anti - PD - L1 antibody against PD - 1 / PD - L1 was observed .

【学位授予单位】：聊城大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.1

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本文编号：1371534