外泌体介导的miR-222及其衍生物在乳腺癌耐药中的研究

发布时间：2018-01-11 04:23

本文关键词：外泌体介导的miR-222及其衍生物在乳腺癌耐药中的研究　出处：《南京医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:乳腺癌化疗耐药是乳腺癌(尤其晚期乳腺癌)患者治疗失败最常见和最难克服的问题之一,也是肿瘤复发、转移的主要原因。本课题组的前期研究发现miR-222能够增强乳腺癌细胞的耐药性,同时miR-222水平在阿霉素耐药的乳腺癌细胞株(MCF/ADR)的外泌体中明显升高,但是其通过外泌体传递耐药的机制并未完全阐明。因此,本课题通过装载miR-222的衍生物(mimic/inhibitor)进入外泌体,建立特殊的外泌体-mimic/inhibitor复合体模型,探讨外泌体中miR-222对乳腺癌耐药的作用及其潜在机制。方法:1、以MCF/7细胞系构建出的耐药株MCF-7/ADR和同步非加药培养的敏感株MCF-7/S为研究对象。免疫荧光验证耐药细胞和敏感细胞的P糖蛋白和TSG101蛋白的表达水平,同时蛋白定量精确测定耐药细胞和敏感细胞分泌的外泌体量差。2、使用共聚焦显微观察摄取不同量(50μg、100μg、200μg)耐药细胞外泌体(A-exos)的敏感细胞;qRT-PCR法检测各组细胞中miR-222的水平;用流式细胞术检测各组经外泌体处理后的细胞与阿霉素共培养后的凋亡率。3、建立电转方程,以最佳条件将miR-222 mimic导入HBL-100外泌体(mimic-exos);研究mimic-exos对敏感细胞耐药性的影响。4、通过电转染将miR-222 inhibitor导入外泌体(inhibitor-exos),耐药细胞与inhibitor-exos共培养后,检测各组细胞miR-222和PTEN的表达变化以及相应细胞耐药性的变化;Western blot和免疫荧光实验验证PTEN的蛋白表达。5、通过比较肿瘤的生长曲线,在荷瘤小鼠体内验证瘤内注射inhibitor-exos对肿瘤耐药细胞的作用,并检测肿瘤组织以及小鼠血清外泌体中miR-222和PTEN的表达变化。6、在新辅助化疗后的乳腺癌患者肿瘤标本中通过免疫组化染色方法验证了PTEN及外泌体标记蛋白TSG101的表达。结果:1.耐药细胞和敏感细胞P糖蛋白和TSG101蛋白的表达明显上调;相同体积的细胞上清中,耐药株MCF-7/ADR分泌的外泌体(A-exos)远远高于敏感株MCF-7/S所分泌的外泌体(S-exos)。2.加入的外泌体量越多,细胞摄取的量也越多;摄取了更多外泌体(1000μg、200μg)的敏感细胞耐药性要明显高于摄取少量外泌体(5(μg)的敏感细胞;摄取了更多耐药细胞外泌体的细胞中miR-222水平明显高于其他组的细胞。3.最佳电转染条件:50μg/100μL外泌体,转染时电压180V;成功构建mimic-exos复合体,与敏感细胞共培养后可明显增强其对阿霉素的耐药性。4.加入inhibitor-exos共培养的耐药细胞的对阿霉素的耐药性减低,流式细胞术检测细胞凋亡率明显增加;且伴随细胞中miR-222水平下调和PTEN的表达增强。5.瘤内注射inhibitor-exos的小鼠肿瘤大小明显小于对照和空白组,肿瘤组织中的miR-222水平下调,且靶基因PTEN的表达增强。6.检测接受新辅助化疗的乳腺癌患者肿瘤组织,发现PTEN在耐药组中低表达,外泌体标记蛋白TSG101在耐药组中高表达。结论:1.耐药细胞比敏感细胞分泌更多的外泌体。2.耐药细胞的外泌体能够通过传递miR-222增强敏感细胞的耐药性。3.构建的mimic-exos复合体和inhibitor-exos复合体能够模拟外泌体介导的miRNAs传递,影响耐药细胞和敏感细胞对阿霉素的耐药性。4.瘤内注射inhibitor-exos能够在体内减低肿瘤耐药性,对耐药肿瘤组织起一定的治疗作用。5.证实外泌体确实参与乳腺癌患者肿瘤化疗耐药进程,且外泌体通过调节miR-222/PTEN通路影响肿瘤细胞的耐药性。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of miR - 222 and PTEN in breast cancer patients with breast cancer ( especially advanced breast cancer ) . The expression of miR - 222 in tumor tissues was downregulated , and the expression of PTEN was enhanced . 6 . It was found that the expression of PTEN in drug - resistant cells was lower than that of sensitive cells .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】