非小细胞肺癌中相关microRNA的筛选及miR-191对A549肺腺癌细胞的迁移侵袭能力影响的研究

发布时间：2018-01-26 18:02

本文关键词： 非小细胞肺癌 miRNA miR-191 预后迁移侵袭　出处：《广西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:现有研究表明mi RNA在多种恶性肿瘤中存在不一样水平的表达异常。本研究旨在探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中相关的miRNA,如miR-195、miR-145、miR-140-3p、mi R-191、miR-126等是否存在表达异常,并选择在NSCLC中存在表达异常的miRNA,分析其与患者临床病理特性的关系及对患者总生存期的影响;通过体外实验初步探究相关miRNA(miR-191)对A549人肺腺癌细胞的迁移、侵袭等细胞功能的影响。方法:第一部分查阅相关文献,确定mi R-195、miR-145、mi R-140-3p、miR-191、miR-126等可能与NSCLC相关的micro RNA作为研究对象。采用实时荧光相对定量聚合酶链式反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织中miRNA的表达的差异性,初步分析各miRNA的表达量与非小细胞肺癌的相关性,根据分析结果初步筛选出可能与非小细胞肺癌的发生发展相关的miRNA,根据筛选结果扩大样本验证初步筛选的结论,并收集标本对应患者的临床病理特征资料及电话随访其生存情况,进一步分析所选miRNA与非小细胞肺癌的相关性。第二部分凭据第一步筛选结果,我们确定mi R-191为我们进一步研究的对象,采用瞬时转染的方法将miRNA-NC、miR-191 inhibitor转入A549细胞中,并根据结果分为三组,空白组(Mock)、阴性对照组(NC)、实验组(miR-191 inhibitor),并对各组A549细胞进行一下研究:(1)划痕实验检测各组细胞24h后的迁移能力的改变;(2)transwell实验检测各组细胞的侵袭能力的改变。结果:第一部分初步筛选中我们对34例nsclc患者的肿瘤组织及对应的癌旁组织进行rt-qpcr检测后发现mir-195、mir-145、mir-140-3p等mirna在肿瘤组织中的表达量与癌旁组织的表达量无明显改变(p0.05);而相对于肿瘤组织,mir-191、mir-126两者表达量存在差异(p0.05)。增加检测样本后,我们发现其差别趋势仍存在,相对于癌旁组织中的表达量,mir-191在肿瘤组织的表达上调(p0.05);mir-126在肿瘤组织中的表达下调(p0.05)。收集患者临床病理特征资料,电话随访患者生存状况进行统计学分析后发现:在肿瘤组织分化程度较低的和(或)存在淋巴结转移的患者中mir-191的表达量升高更明显(p0.05),另外mir-191的表达量较高的患者较mir-191的表达量较低的患者的总生存期更短(p0.05);而在mir-126的临床病理特征分析及患者总生存期的研究中并未发现这种不同(p0.05)。第二部分通过组织rt-qpcr检测及相关数据分析后,我们选择mir-191作为我们的研究对象,采用瞬时转染的方法顺利将mirna-nc、mir-191inhibitor转入a549细胞中,并根据结果分为三组,空白组(mock组)、阴性对照组(nc组)、实验组(mir-191inhibitor组),分析实验数据后发现相对于mock组、nc组,实验组的mir-191的表达量下调约98%,差异具有统计学差别(p0.05),而mock组和nc组中mir-191的表达量无明显的差异(p0.05)。成功沉默mir-191后,我们采用划痕实验检测沉默后的a549细胞迁移能力的改变,与空白对照(mock)及阴性对照(mir-nc)相比,沉默mir-191后a549细胞的划痕愈合的距离显著减小,划痕愈合的时间显著变长,差异具有统计学意义(p0.05)。采用transwell实验检测a549细胞的侵袭能力改变,发现相比与mock组(124.00+6.56)、mir-nc组(123.00+9.95),mir-191inhibitor组(38.33+5.69)穿过半透膜的细胞数目明显减少,细胞侵袭能力被削弱,差异含有统计学意义(p0.05)。结论:1、mi RNA在非小细胞肺癌的发生及发展中扮演着重要的角色,其中miR-191在非小细胞肺癌患者中表达上调,与组织分化程度、淋巴结转移和患者生存期有关,miR-191在组织分化程度较低者,存在淋巴结转移者表达量更高,且miR-191高表达者总生存期更短。而miR-126在非小细胞肺癌中表达成下调趋势,并且它的表达量与患者的临床病理特征及患者的总生存期无明显的关系(p0.05)。2、根据组织实验的结果,我们选择miR-191作为研究对象,在体外实验中,沉默miR-191后,A549细胞的迁移能力减弱(p0.05),侵袭能力减弱(p0.05)。它已被证明,miR-191是非小细胞肺癌的癌基因,它可以通过增加肿瘤细胞的侵袭和迁移能力的方式促进疾病的发展。
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【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【参考文献】