加味半夏泻心汤对2型糖尿病大鼠胰腺PERK-CHOP凋亡通路的影响

发布时间：2018-03-19 20:27

本文选题：加味半夏泻心汤　切入点：糖尿病　出处：《广州中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过观察加味半夏泻心汤对2型糖尿病大鼠血糖、血脂、胰岛素抵抗指数等相关指标的影响,评价加味半夏泻心汤的降糖疗效,根据大鼠胰腺PERK-CHOP凋亡通路中相关蛋白的表达情况,进一步探讨加味半夏泻心汤治疗2型糖尿病的机制以及作用靶点,为临床更好的运用该方提供科学依据。方法:1、80只SPF级(140g±20)雄性Wistar大鼠,适应性喂养1周。按体重随机分组,空白组作对照,喂养普通饲料10周。剩余大鼠给予高糖高脂饲料喂养10周后,采用低剂量STZ腹腔注射建立T2DM模型,11.1mmol ·L-1≤FBG≤33.3mmol·L-并伴有多饮多食多尿消瘦症状为2型糖尿病大鼠,造模成功大鼠随机分为3组,分别为模型组、加味半夏泻心汤组、二甲双胍组。实验共4组大鼠,每组20只。加味半夏泻心汤组:予20g·kg-1.d给药;二甲双胍组:予盐酸二甲双胍200mg·kg-1.d灌胃;模型对照组和空白对照组予等体积蒸馏水灌胃。灌胃5周。2、灌胃期间每周同一时间测1次大鼠的空腹血糖并称重记录,第5周采用2%戊巴比妥钠腹腔麻醉,腹主动脉采血,检测血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β),冰上快速无菌取出胰尾组织液氮中保存,每组另取6只大鼠胰尾置4%多聚甲醛中固定保存。采用Western blot和免疫组化检测各组大鼠胰腺组织的PERK、P-PERK、GRP78、ATF4、CHOP表达和蛋白含量。用TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡数量。采用SPSS22.0对实验数据进行统计分析。实验数据用均数±标准差(x±S)表示,所有均数的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。成果:1、动物一般状态:与正常组比较,模型组多饮多尿多食消瘦症状明显,脱毛,毛色晦暗无光泽,大便干结量少,偶有稀溏,会阴部易感染;加味半夏泻心汤组、二甲双胍组大鼠饮水、进食量较模型组减少,消瘦及脱毛现象减轻,毛色光泽度有所改善,加味半夏泻心汤组大鼠大便性状较模型组溏结不调现象改善,二甲双胍组大鼠大便较模型组量多,质偏软,偶有稀溏。2、对体重的影响:治疗前糖尿病各组大鼠体重均低于正常组(P0.05)。治疗后,与正常组相比,模型组体重明显下降(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组和加味半夏泻心汤组体重均上升,且有显著性差异(P0.05)。3、对血糖、空腹胰岛素及HOMA-IR、HOMA-β、ISI的影响:造模1周后,与正常组相比,各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR显著升高,ISI、HOMA-β下降,差异具有显著性(R0.01)。实验末,与正常组相比,糖尿病各组大鼠FINS下降(P0.05),模型组HOMA-β下降(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组、加味半夏泻心汤组FBG值下降,FINS、HOMA-β上升,具有显著性差异(P0.05)。二甲双胍组与加味半夏泻心汤组HOMA-IR与治疗前相比明显下降,ISI升高,具有显著性差异(P0.05)。4、对血脂的影响:与正常组相比,模型组大鼠血清TG、TC、LDL-C、FFA水平明显上升(P0.01)、HDL-C明显下降(P0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味半夏泻心汤组TG、TC、LDL-C、FFA水平下降(P0.05)、HDL-C水平升高(P0.05)。5、PERK、P-PERK蛋白的表达水平:PERK蛋白各组表达水平无统计学意义。与正常组相比,模型组P-PERK蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组与加味半夏泻心汤组表达水平下降(P0.01)。与正常组相比,模型组P-PERK/PERK显著升高(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组与加味半夏泻心汤组均下降(P0.01)。6、GRP78、ATF4、CHOP蛋白的表达水平:与正常组相比,模型组GRP78、ATF4、CHOP表达水平显著升高(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组与加味半夏泻心汤组GRP78、ATF4、CHOP 表达降低(P0.01)。7、胰岛细胞凋亡:与正常组相比,模型组胰岛细胞凋亡数量显著升高(P0.01);与模型组相比,二甲双胍组与加味半夏泻心汤组胰岛细胞凋亡数量下降(P0.01)。结论:1.内质网应激存在于高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ诱导的2型糖尿病大鼠模型中。2.加味半夏泻心汤可以改善2型糖尿病大鼠的一般状态,在一定程度上调节糖脂代谢,改善胰岛素抵抗,提高糖尿病大鼠的生存质量。3.加味半夏泻心汤可以通过抑制内质网应激PERK-ATF4-CHOP信号通路,减少GRP78、P-PERK、ATF4、CHOP的表达,减少胰岛细胞凋亡,保护胰岛细胞功能,延缓2型糖尿病的病情进展。
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【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】