两株浒苔来源微生物的次生代谢产物研究

发布时间：2016-11-10 16:05

  本文关键词：两株浒苔来源微生物的次生代谢产物研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国海洋大学》 2015年

两株浒苔来源微生物的次生代谢产物研究

陈正波  

【摘要】：海洋来源的微生物已经越来越成为天然产物研究的重点对象,从中发现的新天然产物数量巨大,每年呈递增的趋势快速发展。海洋来源的内生微生物更是具有其研究的特殊价值,因其与宿主进行营养争夺而可能产生一些生物活性优秀的化合物,这为新药研发提供了一个很好的方向。为了寻找当前急需的药物研发先导化合物,本文通过采集青岛浒苔以及其他样品作为内生微生物的来源材料,进行分离筛选,然后通过化学和生物活性两方面的综合考察,开展了浒苔来源内生微生物的次级代谢产物研究工作。主要内容包括：浒苔内生真菌及放线菌的分离培养,微生物的发酵及初步筛选,talent strain的发现以及进一步优化发酵,化合物的分离纯化,单体化合物的结构全面解析鉴定,单体化合物的生物活性评价。从青岛的四大海水浴场(第一海水浴场,第二海水浴场,栈桥海水浴场,石老人海水浴场)采集新鲜浒苔样品,以及其他海洋来源的样品,通过梯度稀释法以及蔗糖密度梯度法分离得到200株微生物。采用pNPG模型进行了α-糖苷酶的活性筛选。而后通过TLC, HPLC进行化学方面的考察,最终确定了两株浒苔来源的微生物作为进一步系统研究的‘'talent strain'—放线菌OUCMDZ3434和真菌OUCMDZ3416。放线菌OUCMDZ3434通过16sRNA进行鉴定为链霉菌Streptomyces sp.。真菌OUCMDZ3416尚未鉴定。通过不同发酵影响条件(发酵时间,酸碱度,天数,盐度等)的考察,全面分析了不同条件下菌株次级代谢产物的变化,最终选定了在已考察的条件中表现最好的方法进行进一步放大发酵,并对发酵液进行了乙酸乙酯的萃取得到粗浸膏。而后通过不同的色谱技术(硅胶柱色谱,凝胶色谱,大孔树脂以及高效液相色谱等)对发酵产物进行了系统的分离纯化,从放线菌OUCMDZ3434中得到了12个单体化合物(1-12),从真菌OUCMDZ3416中得到了6个单体化合物(13-18)。然后通过理化性质以及现代波普技术进行了单体化合物的结构解析鉴定,其中有10个新化合物。所得化合物均为聚酮途径来源。对放线菌OUCMDZ3434所得化合物进行了糖苷酶活性的测试结果显示化合物1-6均比阳性对照药阿卡波糖的活性好,其中化合物1和2表现了非常优秀的活性,IC50分别为19.7和8.3μM,而阿卡波糖则为1.12 mM。综上所述,本文对海洋来源的内生微生物进行了筛选研究,得到了一批活性优秀的菌株,并且对其中的两株浒苔来源的内生微生物进行了系统的次级代谢产物研究,共有18个化合物被分离鉴定,包括10个新化合物,其中有2个为新骨架化合物;而且通过对糖苷酶酶活性的筛选,发现了活性非常显著的化合物。这充分证明了内生微生物具有非常大的研究价值以及非常广阔的研究前景。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R915
【目录】：

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