黄山石耳水溶性多糖的化学结构及其构效关系研究

发布时间：2018-04-05 04:24

  本文选题：黄山石耳　切入点：多糖　出处：《合肥工业大学》2017年硕士论文

【摘要】：黄山石耳是生长在安徽黄山地区的一种药食同源的地衣植物,是一种营养价值较高的滋补食材。多糖是黄山石耳的主要生物活性成分,具有增强机体免疫能力、抗肿瘤、抗病毒以及抗氧化等生物活性。本论文采用现代提取分离纯化技术、结构表征手段、分子修饰方法以及药理活性模型对黄山石耳多糖进行了研究,主要实验结果如下:(1)黄山石耳通过热水浸提法获得的石耳水提粗多糖(UP,得率为5.68%)经EDAE-Cellulose离子交换层析色谱和凝胶渗透色谱技术进行分离纯化,获得三个均一组分多糖UP1-1、UP2和UP3,相对分子量分别为2.81×105 Da、3.33×105 Da和5.05×103 Da。单糖组成分析表明,UP1-1、UP2和UP3都由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,分子摩尔比分别为1.0:4.6:0.8,1.7:1.0:1.2,2.5:1.9:1.8。另外UP3还含有少量的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖;结构表征结果表明UP1-1主链主要包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→4)-β-D-Glcp和(1→6)-β-D-Manp,在(1→6)-β-D-Manp的O-3位连有支链1-β-D-Glcp、(1→3)-β-D-Galp和1-β-D-Galp。UP2主链由(1→6)-β-D-Glcp和(1→6)-α-D-Manp组成,在(1→6)-β-D-Glcp的O-3位连有支链(1→6)-α-D-Galp和β-1-D-Galp。UP3主链包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-D-Xylp,在(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-D-Xylp的O-3位连有支链β-1-D-Galp、β-1-L-Rhap和(1→3)-β-L-Arap。(2)采用氯磺酸-吡啶法和混合磷酸盐试剂法分别对黄山石耳多糖UP2进行了硫酸化和磷酸化修饰。硫酸化分子修饰结果表明,多糖UP2经修饰后,获得取代度为1.67的硫酸化片段UP2-S,其相对分子量为2.45×107 Da;红外光谱实验结果表明,在1250 cm-1、813 cm-1和588 cm-1处吸收峰的增强分别是由不对称的S=O键伸缩振动、对称的C-O-S拉伸振动和O-S-O的不对称变形引起的,以上都证实了-OSO3-1基团的加入,硫酸基成功与多糖UP2结合。磷酸化分子修饰结果表明,共获得9个磷酸化片段,其中,在磷酸化试剂(三聚磷酸钠与三偏磷酸钠质量比为6:1)、p H=7、反应温度为90℃、反应时间为4 h的反应体系下,获得取代度最大为0.836的磷酸化衍生片段UP2-P,红外光谱实验结果表明,在1260 cm-1和1110cm-1处的特征吸收峰分别归因于P=O键和P-O-C的伸缩振动,再次验证了多糖UP2磷酸化修饰的成功。(3)采用体外生物活性实验检测了黄山石耳各多糖片段的免疫调节活性和抗肿瘤活性,并分析了其构效关系。通过多糖体外刺激巨噬细胞RAW264.7进行免疫调节活性的研究,研究结果表明多糖UP1-1、UP2和UP3均能够增强巨噬细胞的增殖活性、中性红吞噬活性,以及促进NO产生量的增加。体外抗肿瘤活性研究表明,多糖组分UP1-1、UP2和UP3对肝癌细胞Hep G2具有不同程度的肿瘤抑制活性。硫酸化衍生多糖在所有浓度下,均显示出较高的体外抗肿瘤活性,当UP2-S浓度达到200μg/m L时,肿瘤抑制率达到最大为50.36%,是相同浓度下的UP2的肿瘤抑制率的2.4倍。UP2-P对肝癌细胞Hep G2具有不同程度的肿瘤抑制活性,其中UP2-P5在各个浓度下均具有较好的抗肿瘤活性,最高抑制率可达40.80%。本研究结果对黄山石耳多糖的开发及应用具有一定的指导意义。
[Abstract]:Mount Huangshan stone ear is a kind of medicinal and edible lichens grow in Anhui Mount Huangshan area, is a kind of high nutrition nourishing ingredients. Polysaccharides are the main bioactive components in Mount Huangshan stone ear, can enhance immune ability, antitumor, antiviral, antioxidant and other biological activity. This paper uses modern extraction and separation and purification technology, structural characterization, molecular modification and pharmacological activity model to study Mount Huangshan stone fungus polysaccharide, the main results are as follows: (1) Mount Huangshan stone ear by hot water extraction from stone ear water extraction of crude polysaccharide (UP was 5.68%) chromatography and gel permeation chromatography separation purified by EDAE-Cellulose ion exchange, three homogeneous polysaccharides UP1-1, UP2 and UP3, the relative molecular weight of 2.81 * 105 Da respectively, 3.33 Da and 5.05 x 105 x 103 Da. monosaccharide composition analysis showed that UP1-1, UP2 and UP3 鐢辩敇闇茬硸,钁¤悇绯栧拰鍗婁钩绯栫粍鎴，

本文编号：1713198