纳米炭搭载化疗药对大鼠肝癌淋巴示踪效果的实验研究

发布时间：2018-04-12 08:54

本文选题：纳米炭示踪剂 + 淋巴引流示踪　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：纳米炭混悬注射液(卡纳琳)已成熟用于临床,可为恶性肿瘤根治性手术提供良好的淋巴示踪效果。在甲状腺癌,乳腺癌,胃肠道恶性肿瘤方面报道很多,在肝癌方面报道罕见。本研究组一直致力于纳米炭在肝癌淋巴示踪方面的临床应用性研究,纳米炭对(大鼠)肝癌切缘及淋巴引流示踪效果方面的研究,证明了纳米炭对(大鼠)肝癌淋巴引流示踪具有明显的作用,能够提高(大鼠)肝癌转移淋巴结切除的阳性率;此外,在纳米炭和亚甲蓝对(兔)肝癌淋巴引流示踪效果方面的对比性研究,也证明了纳米炭比亚甲蓝在(兔)肝癌引流淋巴结黑染程度更明显,缩短了术中淋巴结清扫所用的时间。本实验主要确切了解纳米炭搭载化疗药物后电镜下的形态及结构,比较单纯纳米炭与纳米炭搭载化疗药后在大鼠肝癌淋巴引流的示踪效果。目的:使用扫描电镜拍摄单纯纳米炭及纳米炭搭载不同化疗药物后的形态及结构。比较单纯纳米炭混悬液与纳米炭搭载不同化疗药物的混悬液对大鼠肝癌淋巴引流的示踪效果区别,为肝癌转移淋巴结的清扫及淋巴靶向化疗提供参考。方法:1试剂制备方法1.1使用漩涡+水浴超声振摇方法制备纳米炭搭载5-Fu混悬液、纳米炭搭载表阿霉素混悬液。1.2将纳米炭混悬液、5-Fu注射液、纳米炭搭载5-Fu混悬液、纳米炭搭载表阿霉素混悬液通过冷冻干燥法制成冻干粉剂,使用FEI Quanta200(USA)扫描电镜拍摄单纯纳米炭、纳米炭搭载5-Fu、纳米炭搭载表阿霉素的电镜照片。2动物模型制作方法及实验分组选用Walker-256细胞株,采取大鼠腹腔注射,经腹水培养扩增癌细胞。抽取癌性腹水离心提纯,取得高纯度的癌细胞,然后,采用直接注射法制备大鼠肝癌模型,将此模型分别设立A\B\C三组,每组各30例。A组(实验组):纳米炭搭载5-Fu混悬液注射;B组(实验组):纳米炭搭载表阿霉素混悬液注射;C组(对照组):单纯纳米炭混悬液注射。三组均被实施开腹术中行肝癌瘤体中心注射混悬液,注射后观察三组肝癌区域淋巴引流黑染的效果。注射后观察30min,待淋巴结黑染稳定,模拟人肝癌根治术清扫黑染淋巴结,淋巴结清扫分为三组,即近距离组、中距离组、远距离组。近距离组设定第一、第二肝门附近的淋巴结;中距离组设定肝十二指肠韧带、肝胃韧带周围淋巴结;远距离组设定肠系膜根部及腹主动脉周围淋巴结。记录清扫黑染淋巴结的数量、位置。观察淋巴结黑染程度,淋巴结颜色无改变记为0分;淋巴结部分染黑或者染成灰色记为0.5分;淋巴结全部染黑记为1分。所有清扫的黑染淋巴结均逐例标记后,浸入10%中性甲醛溶液中保存,行HE染色,镜下观察淋巴结有无癌转移,记录阳性转移淋巴结的数量。3统计方法采用SPSS 17.0软件进行统计分析。三组清扫黑染淋巴结的数量各自以均数±标准差(-x±S)表示,多组间进行比较在满足正态性及方差齐性的情况下,采用单因素方差分析,计数资料采用卡方检验,均以P0.05为差异有统计学意义。结果:拍摄到纳米炭、5-Fu、表阿霉素、纳米炭搭载5-Fu及纳米炭搭载表阿霉素后的扫描电镜照片。三组共清扫黑染淋巴结876枚。纳米炭搭载5-Fu组,清扫淋巴结总数292枚,平均14.83±0.874枚;纳米炭搭载表阿霉素组,清扫淋巴结总数275枚,平均14.60±1.133枚;纳米炭组,清扫淋巴结总数309枚,平均14.73±0.772枚。经正态性检验P均0.05,数据服从正态分布。经方差齐性Levene检验,P=0.853(P0.05),满足方差齐性;三组比较采用方差检验:F=0.045,P=0.956(P0.05),结果提示:三组黑染淋巴结数量无显著性差异,说明搭载不同化疗药物后的纳米炭混悬液与单纯纳米炭混悬液在大鼠肝癌区域引流淋巴结黑染的数量方面无明显差别。纳米炭搭载5-Fu混悬液组清扫淋巴结总数292枚,近距离组107枚,占33.6%;中距离组129枚,占32.8%;远距离组56枚,占33.3%。纳米炭搭载表阿霉素混悬液组清扫淋巴结总数275枚,近距离组102枚,占32.1%;中距离组121枚,占30.8%;远距离组52枚,占31.5%。单纯纳米炭混悬液组清扫淋巴结总数309枚,近距离组109枚,占34.3%;中距离组143枚,占36.4%;远距离组57枚,占34.5%。三组黑染淋巴结位置构成比经X2检验,P0.05。结果表明,三组黑染淋巴结在不同位置的分布数量的构成比无显著性差异,说明搭载不同化疗药物后的纳米炭混悬液与单纯纳米炭混悬液在大鼠肝癌不同区域淋巴结示踪效果方面无明显差别。纳米炭混悬液组淋巴结黑染评分为0.876,纳米炭搭载表阿霉素混悬液组淋巴结黑染评分为0.764,纳米炭搭载5-Fu混悬液组淋巴结黑染评分为0.783,结果表明,三组淋巴结黑染程度相差不大,说明搭载不同化疗药物后的纳米炭混悬液与单纯纳米炭混悬液在区域引流淋巴结黑染程度方面无明显差别。纳米炭搭载5-Fu混悬液组清扫淋巴结总数292枚,其中HE染色阳性转移的淋巴结有7枚,阳性转移率为2.40%;纳米炭搭载表阿霉素混悬液组清扫淋巴结总数275枚,其中HE染色阳性转移的淋巴结有5枚,阳性转移率为1.82%;纳米炭混悬液组清扫淋巴结总数309枚,其中HE染色阳性转移的淋巴结有8枚,阳性转移率为2.59%;三组黑染淋巴结中的阳性转移率经Fisher精确检验,P0.05。结果表明,三组黑染淋巴结中阳性转移淋巴结的检出率无显著性差异,说明搭载不同化疗药物后的纳米炭混悬液与单纯纳米炭混悬液在阳性转移淋巴结的检出率方面无明显差别。通过以上结果可以说明纳米炭搭载不同的化疗药物与单纯纳米炭对大鼠肝癌淋巴结示踪效果无显著性差异。结论:纳米炭作为化疗药物的良好载体,依其广阔的表面吸附能力,能很好的吸附相关化疗药物。本实验证实,纳米炭搭载化疗药物后并不影响其对淋巴组织良好趋向性,不影响大鼠肝癌区域淋巴引流示踪效果,为临床中肝癌根治术直视下更加彻底的清扫淋巴结及对隐匿性淋巴组织的靶向化疗,提供了新的思路和方法。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】