五生饮水煎剂的有效成分含量测定和毒性试验研究
本文选题：五生饮水煎剂 + HPLC ； 参考：《广州中医药大学》2017年硕士论文
【摘要】：目的:1.探索五生饮水煎剂供试品的最佳制备方法;探索煎煮过程中包煎、离心工艺对乌头类生物碱含量的影响;对五生饮水煎剂中的三种单酯型乌头类生物碱的含量测定进行方法学考察;观察水煎剂中总乌头类生物碱在煎煮过程中的含量变化情况;观察低温防腐储藏条件对五生饮稳定性的影响。2.观察五生饮水煎剂的急性毒性反应,了解是否出现急性毒性反应及其作用剂量。通过30天亚急性毒性试验,观察其对大鼠毒性反应及剂量-反应关系,停药后是否出现延迟毒性。方法:1.采用HPLC对五生饮水煎剂供试品水提醇沉组、0.01%HCL乙醇溶液沉淀组、蒸干药典法组、乙醚萃取组进行含量测定,观察峰面积、波峰及拖尾因子;对水煎剂采用布包煎、离心工艺,观察30min、60min、90min、120min、150min不同时间点7种供试品波峰情况;采用HPLC法测定五生饮水煎剂中三种单酯型乌头类生物碱的含量,初步建立方法学考察;观察煎煮过程中Oh、0.5h、1h、1.5h时间点乌头类生物碱的含量变化情况;测定6个月内水煎剂中单酯型乌头类生物碱的含量。2.急性毒性试验:采用最大给药量法,单次口服五生饮水煎剂,40.5g生药/kg,相当于临床患者用量的96.4倍。按30ml/kg体重24h连续灌胃3次,间隔至少4h,观察给药期及给药后14天SD大鼠的外观、行为、精神、分泌物及大体脏器解剖病理变化。亚急性毒性试验:将128只SD大鼠分为空白、低、中、高剂量4组,每组雌雄各16只,雌雄各4笼。予以3.4g生药.kg~(-1).d~(-1)、6.8g生药.kg~(-1).d~(-1)、13.5g生药.kg~(-1).d~(-1)不同剂量五生饮水煎液对SD大鼠进行连续30天给药,停药恢复28天,给药29天及恢复期结束,对每组每性别前2笼分别进行眼科、尿液检查,给药30天及恢复期结束,同样方法进行血常规、血生化、凝血、脏器指数及主要脏器病理切片检查。结果:1.乙醚萃取法制成的供试品与3种对照品相比,在20min、24min、26min左右处峰型对应且峰面积稳定;包煎、离心工艺未对水煎剂中生物碱成分产生影响;苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱可以作为五生饮水煎剂的含量测定指标;三种单酯型乌头类生物碱含量经历先轻微下降而后逐渐上升,双酯型乌头类生物碱含量逐渐下降,至1h时间点完全无法检测出;五生饮水煎剂在6个月内单酯型乌头类生物碱含量稳定。2.急性毒性试验中,未见大鼠死亡,受试大鼠3次给药后的外观、行为精神、对刺激的反应、分泌物、排泄物未见明显异常,水煎剂的最大给药量为40.5g生药/kg。亚急性毒性试验中,各给药组SD大鼠一般形态良好,体重呈平稳上升趋势,摄食量、眼科检查未见明显异常,给药29天高剂量组雄鼠SG值偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05);恢复期结束,高剂量组雌鼠SG值偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。给药29天,低、中剂量组雌鼠尿pH值偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05);给药30天,低剂量组雌鼠血红蛋白浓度(HGB)和红细胞容积(HCT)偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05);恢复期结束,高剂量组雌鼠平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。恢复期结束,中剂量组雌鼠凝血酶原时间(PT)缩短,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。给药30天,高剂量组雌鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(PP0.05);恢复期结束,低剂量组雌鼠血糖(GLU)偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05);给药30天,低剂量组雌鼠血尿素氮(Urea)偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05);恢复期结束,高剂量组雄鼠甘油三酯(TG)偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。恢复期结束,高剂量组雄鼠血钾(K+)偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。高剂量组雌鼠脾脏系数偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义(P0.05)。其余检测值与大鼠主要脏器病理切片未见明显异常。结论:1.选用低温乙醚萃取方法制备五生饮供试品;初步确定对生半夏、生川乌、生天南星布包煎,对水煎剂进行离心的初步工艺改良;HPLC测定五生饮水煎剂中三种乌头类生物碱的方法可靠,准确性良好;五生饮水煎剂在低温防腐条件下6个月内稳定性良好。2.急性毒性试验中,在24h内对SD大鼠予以40.5g生药/kg连续灌胃3次,试验阶段未见明显相关毒性反应。亚急性毒性试验中,所有个体数据均在背景范围内或无剂量相关依赖性,五生饮水煎剂对SD大鼠灌胃给药30天未见有明显毒性反应,五生饮水煎剂的无可见有害作用水平(NOAEL)为13.5g生药.kg~(-1).d~(-1)。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R286.0;R285.1
【参考文献】
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，本文编号：1746830
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