建立苦牛大力质量评价指标及对其部分药效进行研究

发布时间：2018-04-22 03:32

本文选题：苦牛大力 + 总黄酮　；参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:建立苦牛大力中芒柄花素和高丽槐素的含量测定方法,苦牛大力总黄酮(the total flavonoids of Radix Millettia Championi,FRMC)的抗炎和提高免疫作用以及对小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及作用机制,并探讨FRMC与甜牛大力总黄酮(the total flavonoids of Radix Millettia Speciosa,FRMS)在抗炎、提高免疫和保护ALI方面作用效果的差异,为苦牛大力在抗炎和提高免疫及保护ALI方面是否可作为甜牛大力的替代或补充品及其药用价值的开发应用提供实验依据和理论基础。方法:1.含量测定:采用HPLC法,以芒柄花素和高丽槐素作为标准品,选用Welchrom-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),测定的色谱条件为:流动相为乙腈-水(37.5:62.5),芒柄花素的检测波长为248nm、高丽槐素的检测波长为309 nm,对苦牛大力和甜牛大力中芒柄花素和高丽槐素含量进行测定并比较其含量的差异。2.抗炎和提高免疫作用的研究:采用二甲苯引起小鼠耳肿胀、角叉菜胶导致小鼠足肿胀、醋酸导致小鼠毛细血管通透性增加以及棉球置于小鼠腹股沟诱发肉芽肿炎症模型及环磷酰胺制备小鼠免疫抑制模型来观察FRMC的抗炎和提高免疫作用,并与FRMS抗炎和提高免疫作用进行比较。3.对ali的保护作用:鼻腔滴注脂多糖(lps)制备小鼠ali模型,测定各组小鼠的肺系数、肺泡灌洗液(broncholveolarlavagefluid,balf)中白细胞(whitebloodcell,wbc)数目和总蛋白(pro)含量、肺组织中超氧化物歧化酶(superoxidasedismutase,sod)和丙二醛(mda)含量的变化;用酶联免疫吸附测定法(elisa法)测定各组小鼠肺组织中白细胞介素6(il-6)、白细胞介素-1bata(il-1β)和肿瘤坏死因子(tnf-α)的表达水平;采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining,he)观察小鼠肺组织病理形态学的改变。4.对ali的保护机制研究:采用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中核转录因子-κbp65(nf-κbp65)蛋白的表达量;实时荧光定量pcr测定各组小鼠肺组织中il-6、tnf-α、nf-κbp65及toll样受体4(tlr4)mrna的表达量。结果:1.苦牛大力和甜牛大力芒柄花素和高丽槐素的含量情况:苦牛大力甜牛大力(p0.05)。2.与模型对照组比较,frmc各剂量组均可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀、角叉菜引起的小鼠足肿胀,降低醋酸引起腹腔毛细血管通透性的增加,减轻小鼠肉芽肿(p0.05或p0.01);frmc中、高各剂量及frms各剂量组均可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数,frmc和frms中、高剂量组均可提高免疫抑制小鼠的廓清指数、吞噬指数及迟发型变态反应(delayedtypehypersensitivity,dth)程度(p0.01或p0.05);其中,frmc低、中剂量组对二甲苯引起的小鼠耳肿胀作用强于frms(p0.05),而对小鼠肉芽肿抑制作用弱于frms(p0.05),在提高廓清指数方面,frmc低剂量组强于frms(p0.05),frmc高、中剂量组提高dth程度较frms相应剂量组弱(p0.01或p0.05)。3.与模型对照组比较,frmc和frms各剂量组可不同程度地降低小鼠肺系数、pro渗出量(p0.05或p0.01),减少小鼠balf中wbc数(p0.05或p0.01),不同程度地增加肺组织中sod的含量,减少mda的含量(p0.05或p0.01),不同程度地减少肺组织tnf-α、il-6、il-1β的分泌量(p0.05或p0.01);其中,frmc高剂量组对提高sod作用较frms弱(p0.01),frmc中、高剂量组对mda的降低作用较frms弱(p0.05),其他指标frmc与frms相应剂量组作用效果相似(p0.05);病理形态学检查显示:frmc和frms均可改善肺组织中炎性细胞浸润、肺间质增厚、肺水肿等情况,减轻lps对小鼠肺组织的损害。4.与模型对照组比较,frmc和frms各剂量组均可减少nf-κbp65蛋白在肺组织中的表达水平(p0.01);frmc各剂量组可不同程度地抑制tlr4、nf-κbp65、il-6和tnf-αmrna的表达量(p0.05或p0.01),frms各剂量组可以降低肺组织中nf-κbp65、il-6和tnf-αmrna的表达水平(p0.05),frms中、高剂量组可抑制tlr4mrna的表达水平(p0.05或p0.01);与frms相应剂量组比较,frmc低剂量组抑制小鼠肺组织中nf-κbp65蛋白、nf-κbp65及tlr4mrma的表达强于frms(p0.01),frmc高剂量抑制il-6mrma的表达强于frms(p0.05),余下指标,frmc和frms作用效果相似(p0.05)。结论:1.该HPLC方法可用于苦牛大力芒柄花素和高丽槐素的含量测定;2.FRMC具有良好的抗炎和提高免疫作用,抑制耳肿胀强于FRMS,抑制小鼠肉芽肿抑制弱于FRMS,提高免疫作用稍弱于FRMS;3.FRMC和FRMS对LPS致小鼠ALI均具有较好的保护作用,作用机制与干扰TLR4/NF-κB通路,抑制炎症性因子的表达及生成有关。
[Abstract]:Objective : To establish a method for the determination of anti - inflammatory and anti - inflammatory effects of Radix Millettia speciosa ( FRMS ) in mice , and to study the protective effects of FRMC on acute lung injury ( ALI ) . The expression of interleukin - 6 ( IL - 6 ) , interleukin - 1bata ( il - 1尾 ) and tumor necrosis factor ( TNF - 伪 ) in lung tissues of mice were determined by enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . The results showed that frmc and frms could significantly inhibit the expression of nf - k b65 , il - 6 and fm4mrma in lung tissues ( p . 05 or p0.01 ) .

【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R285.5

【参考文献】