高尿酸血症对足细胞及相关分子podocalyxin、podocin的影响及刺五加水煎液对其保护作用的研究
发布时间：2018-04-30 19:50
本文选题：高尿酸血症肾病 + 足细胞 ； 参考：《湖北民族学院》2017年硕士论文
【摘要】：目的1、通过雄性Sprayue-Dawley(SD)大鼠动物实验建立高尿酸血症肾病模型,检测造模前后大鼠血尿酸(UA)、血肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)的值,通过肾脏病理学观察足细胞足突(foot process FP)的融合情况,应用免疫组化和western-Blot检测足细胞标记蛋白的表达水平,确立造模成功。2、应用刺五加水煎液灌胃各组高尿酸血症肾病(hyperuricemianephropathy HN)大鼠,观察治疗后各组大鼠的血UA、Scr及BUN的变化情况,通过肾脏病理学观察治疗后足细胞的修复情况,应用免疫组化和western-Blot检测治疗后足细胞标记蛋白的表达水平,初步探讨其对高尿酸血症肾病的保护作用。方法方法1:将40只SD大鼠,随机分成空白组(BG)8只、模型组(MG)32只。空白组(BG)用等量0.9%氯化钠注射液灌胃,模型组(MG)用氧嗪酸钾盐(oxanine acid OA)按 500mg/kg.d 的剂量,加羧甲基纤维素(carboxy methyl cellulose CMC)配成浓度为0.8%的悬浮液灌胃,2小时后酵母膏(Yeast Extract YE)以30g/kg.d的剂量灌胃,3周后两组大鼠各取8只,通过心脏取血及开腹取出肾脏,检测大鼠血尿酸值及肾功能,观察足细胞足突(FP)的融合情况,通过免疫组织化学及western-Blot方法检测各组大鼠足细胞podocin、podocalyxin(PCX)表达水平情况。方法2:将模型组(MG)剩下的24只SD大鼠随机分成中药低剂量组(LCG)、中剂量组(MCG)、高剂量组(HCG),各组8只大鼠,刺五加水煎液按低、中、高剂量分别以l08mg/kg、216mg/kg、432mg/kg灌胃,每天一次,疗程5周后,以同样的方法心脏取血及剖腹收集肾脏组织两小块,一块快速置于-80℃冰箱保存,一块以4%多聚甲醛固定。观察各组治疗后BUN、UA、Scr的值及肾脏足细胞的变化,并通过免疫组化及western-Blot方法检测各组足细胞标记蛋白的表达情况。结果1、应用尿酸酶抑制剂联合酵母膏法造模3周后,MG大鼠Scr、UA、BUN值均明显高于BG(P0.05)。光镜下可见两组大鼠的肾小球基底膜(GBM)无明显增厚,系膜细胞(MC)及系膜基质(MM)无明显的增生,均未见嗜复红蛋白沉积,模型组(MG)有肾间质炎性细胞的浸润。电镜下可见MG足细胞肿胀、空泡变性、足突(FP)节段性的融合。免疫组化染色PCX、podocin主要在肾小球足细胞上表达,可见空白组PCX、podocin沿肾小球毛细血管襻呈线性强阳性表达,呈棕褐色、着色深,模型组表达明显减少或者缺失,经统计学分析MG组AOD值与BG组比较显著降低,差异有统计学意义(p0.05)。凝胶电泳条带见MG组条带亮度明显减低,说明模型组PCX、podocin的表达量减少,通过光密度值分析见模型组PCX、podocin表达与BG组比较显著降低,差异有统计学意义(p0.05)。2、应用刺五加水煎液灌胃5周后,中药组大鼠的血肌酐、血尿酸值均明显低于模型组(P0.05);中药各组与BG比较,Scr、UA的值之间无统计学意义(P0.05);光镜下可见各组大鼠GBM未见增厚,MC及MM无明显的增生,肾小球内均未见明显嗜复红蛋白的沉积,BG肾间质炎性细胞的浸润较其它组减轻;电镜下中药各组与模型组比较,FP融合,足细胞肿胀、空泡变性等明显减轻。免疫组化染色模型组PCX、podocin表达明显减少或者缺失,中药各组肾组织PCX、podocin沿肾小球毛细血管襻呈线性阳性表达,呈浅褐色、着色较深,以中剂量组着色加深明显,统计学分析与MG组比较明显升高,且差异有统计学意义(p0.05);凝胶电泳条带MG组PCX、podocin表达量减少,中、高剂量组PCX、podocin表达量增加;通过光密度值分析中、高剂量组PCX、podocin表达与MG比较显著升高,有统计学意义(p0.05)。结论1、应用氧嗪酸钾盐(OA)联合酵母膏(YE)法成功造模出高尿酸血症大鼠模型,持续可靠的高尿酸血症可导致足细胞的肿胀、空泡变性,足突(FP)的融合,标记蛋白分子podocalyxin(PCX)、podocin的表达下调,加速了肾功能的损害。2、刺五加水煎液可以显著降低血尿酸、血肌酐的值,并部分逆转高尿酸血症对肾脏足细胞足突的融合,上调肾组织足细胞标记蛋白分子PCX、podocin,对高尿酸血症肾病起一定的修复保护作用。
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本文编号：1825952
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