绞股蓝总皂苷对小鼠实验性视神经炎视神经及视网膜保护作用的研究

发布时间：2018-05-18 03:13

本文选题：绞股蓝总皂苷 + 视神经炎　；参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的诱导C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)动物模型,应用绞股蓝总皂苷(Gypenosides,GPs)进行干预,观察小鼠神经功能行为改变、视神经及视网膜形态学改变、视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells,RGCs)凋亡情况,探讨GPs对EAE小鼠视神经及视网膜的保护作用。方法应用MOG35-55多肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,实验分为正常对照组、EAE模型组、GPs干预组、甲基强的松龙组(MP组)、GPs与甲基强的松龙联合干预组(COM组)。自免疫后第7天起,GPs干预组每天给予腹腔内注射GPs 30mg/kg,连续给药至动物处死;MP组每天给予腹腔内注射甲基强的松龙20mg/kg,连续给药3天;COM组每天给予腹腔内注射甲基强的松龙20mg/kg,连续给药3天,给予腹腔内注射GPs 30mg/kg,连续给药至动物处死。每天称量小鼠体重,观察记录神经功能表现、评分,于免疫后第7天进行视觉诱发电位检查;于免疫后第14天、第20天、第30天、第40天进行OCT检查,于免疫后第20天、第40天取小鼠视神经及视网膜组织制成石蜡切片,采用HE染色评估视神经、视网膜炎性细胞浸润情况,TUNEL法检测RGCs凋亡改变。结果1、发病时间、评分:正常对照组小鼠未出现症状;实验组小鼠于免疫后一周左右体重稍有下降,后逐渐增长;实验组小鼠于免疫后第9天起陆续发病。EAE组小鼠发病率为100%,神经功能评分较高,病情最严重;GPs组发病率为97%,COM组、MP组发病率均为90%。COM组可推迟发病时间,与EAE组相比,差别具有统计学意义。正常对照组小鼠评分均为0分,免疫后第14天,COM组与EAE组相比,症状较轻,评分较低,差别具有统计学意义;在其余各时间段三组药物干预组小鼠症状评分与EAE组相比,总体评分较低,但差别无统计学意义。2、VEP:正常对照组、EAE组小鼠免疫后第7天VEP检查结果显示EAE组小鼠的N1波潜伏期、P1波潜伏期、P2波潜伏期均较正常对照组延长,P1波振幅较正常对照组下降,差别具有统计学意义(P0.05);而N2波潜伏期、P2波振幅与正常对照组相比无明显差异。3、OCT:免疫后第20天,EAE组RNFL与正常对照组、三个药物干预组相比明显变薄,差别具有统计学意义;三个药物干预组之间对比差异不大,且均与正常对照组相似厚度,无统计学差异。免疫后第30天,EAE组RNFL进一步变薄,EAE组、MP组RNFL与正常对照组相比均明显变薄P0.01,EAE组为甚,正常对照组、GPs组、COM组相似厚度,无统计学差异;三个药物干预组均较EAE组厚,具有统计学差异;MP组较GPs组、COM组薄,差别具有统计学意义。免疫后第40天,EAE组、MP组RNFL进一步变薄,GPs组、COM组相似厚度且均与正常对照组相似厚度,无统计学差异;GPs组、COM组均较EAE组、MP组为厚,具有统计学差异。4、HE染色:正常对照组小鼠视网膜结构排列整齐,染色均匀,未发现有炎性细胞浸润;视神经纵切面HE染色均匀,神经纤维整齐均匀排列,未观察到有炎性细胞浸润现象。于小鼠免疫后第20天,EAE组视网膜、视神经可见较多数量的炎性细胞浸润,水肿较明显,神经纤维排列紊乱,大量空泡形成;三个药物干预组炎性浸润程度相似且均较EAE组少见,水肿较轻。于小鼠免疫后第40天,各组小鼠视神经、视网膜的炎性细胞浸润均较前减少,水肿较前减轻,三个药物干预组与EAE组相比,神经节细胞层水肿较轻,炎性细胞也较少见。可见EAE组、MP组RGCs较前明显减少,排列疏松。5、TUNEL染色:正常对照组小鼠几乎未观察到RGCs凋亡;实验组均可见不同程度的RGCs凋亡,其中以EAE组、MP组最为明显,且随着时间的推移,凋亡细胞数目逐渐增多,与正常对照组相比具有显著差异。GPs组、COM组凋亡细胞相对较少,随着药物干预时间的延长,存活的RGCs较EAE组多。结论(1)绞股蓝总皂苷与甲基强的松龙联合运用可推迟EAE小鼠的发病;(2)绞股蓝总皂苷单独或与甲基强的松龙联合运用可阻止EAE病变中视网膜神经纤维层变薄,对其起到保护作用;(3)绞股蓝总皂苷可减轻EAE炎症反应;(4)绞股蓝总皂苷可减少EAE视网膜神经节细胞凋亡,起到神经保护作用。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of GPs on optic nerve and retina in C57BL / 6 mice . Compared with the normal control group , there was no significant difference between the two groups . Compared with the normal control group , there was no significant difference between the two groups : the N1 wave latency , the P1 wave latency and the P2 wave latency were significantly lower than those in the normal control group . Compared with normal control group , there were no inflammatory cell infiltration . ( 2 ) The combined use of gypenoside alone or combined with methyl prednisolone can prevent the retinal nerve fiber layer from thinning and protect it ; ( 3 ) the gypenoside can reduce the inflammatory reaction of rats ; and ( 4 ) the gypenoside can reduce the apoptosis of the ganglion cells of the retina and play a role of nerve protection .
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R774.6

【参考文献】